海洋生物Ⅰ號提取物對人肝癌裸鼠移植瘤的作用及機制.pdf

1、目的:
　　從海洋生物Ⅰ號中提取、分離出抗腫瘤活性成分，研究其對人肝癌細胞系（HepG2）裸鼠移植瘤生長的影響及作用機制。
　　方法:
　　1.采用乙醇冷浸漬法和系統(tǒng)溶劑法從海洋生物Ⅰ號中提取，分離活性成分。
　　2.MTT法檢測海洋生物Ⅰ號提取物體外對人肝癌細胞系HepG2的生長抑制作用。
　　3.流式細胞術(shù)檢測細胞DNA含量（分析細胞周期和凋亡），檢測HepG2細胞的PCNA，Cyclin D1和Cyc

2、linA蛋白表達。
　　4.激光共聚焦掃描顯微鏡熒光定量法檢測HepG2細胞PCNA蛋白的表達。
　　5.用皮下注射法建立人肝癌細胞系HepG2裸鼠移植瘤模型;通過腹腔給藥途徑和瘤近似體積測量，瘤倍增時間測定，瘤重測定，病理檢驗，免疫組織化學方法等來觀察海洋生物Ⅰ號提取物對人肝癌細胞系HepG2裸鼠移植瘤生長的抑制作用。
　　結(jié)果:
　　1.新鮮的海洋生物Ⅰ號經(jīng)乙醇冷浸漬法提取和系統(tǒng)溶劑液液萃取法分離得到石油醚提

3、取物，乙酸乙酯提取物和水飽和正丁醇提取物，即提取物A、B和C，提取率分別是0.5％，0.2％和0.18％。
　　2.海洋生物Ⅰ號提取物體外對人肝癌細胞系HepG2生長抑制實驗結(jié)果顯示:提取物A、B、C在不同時間點對人肝癌HepG2細胞生長均有不同程度抑制作用，并呈現(xiàn)明顯的時-效和量-效依賴性。但提取物B對人肝癌細胞系HepG2生長抑制作用最強，提取物C次之，提取物A作用最弱。
　　3.裸鼠實驗結(jié)果顯示:成功復制人肝癌細胞系H

4、epG2裸鼠移植瘤模型，海洋生物Ⅰ號B提取物對人肝癌細胞系HepG2裸鼠移植瘤的生長具有明顯的抑制作用，提取物B高，中，低劑量組的生長抑制率分別是34.07％，23.70％和21.04％。
　　4.流式細胞術(shù)檢測HepG2細胞DNA含量（分析細胞周期和凋亡），檢測 HepG2細胞的PCNA、Cyclin D1和Cyclin A蛋白表達量。檢測結(jié)果顯示:海洋生物Ⅰ號乙酸乙酯提取物能使人肝癌細胞系HepG2細胞周期阻滯于S期，隨著提取

5、物的濃度升高，S期細胞逐漸增多。HepG2細胞的PCNA蛋白表達水平隨著提取物處理濃度的增高而增強。Cyclin D1和Cyclin A蛋白表達水平隨著提取物處理濃度的增高而逐漸降低，與對照組比較均有顯著性差異。
　　5.激光共聚焦掃描顯微鏡熒光定量法檢測HepG2細胞PCNA蛋白表達，檢測結(jié)果顯示:海洋生物Ⅰ號提取物B能使HepG2細胞PCNA蛋白表達，陽性細胞核顯綠熒光，隨著提取物B的濃度升高，陽性細胞逐漸增多，熒光強度也增強

6、，并且與對照組比較均有顯著性差異。免疫組織化學方法測裸鼠移植瘤組織PCNA蛋白的表達，顯示隨著提取物B濃度的提高，裸鼠移植瘤組織PCNA染色表達增強，其中以提取物B高劑量組染色表達最高，為棕色深染。
　　結(jié)論:
　　1.海洋生物Ⅰ號提取物A，B、C在不同時間點對人肝癌細胞系HepG2生長均有不同程度抑制作用，并呈現(xiàn)明顯的時-效和量-效依賴性。海洋生物Ⅰ號提取物B對人肝癌細胞系HepG2生長抑制作用最強，提取物C次之，提取物A