維A酸注射液對(duì)裸鼠人肝癌細(xì)胞SMMC-7721移植瘤的抑制作用.pdf

1、目的:維A酸為目前用于臨床腫瘤化學(xué)治療及預(yù)防較為成熟的維甲酸類藥物之一,可用于腫瘤的化學(xué)預(yù)防和治療。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上,觀察維A酸注射液對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖及裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響,檢測(cè)腫瘤組織細(xì)胞凋亡和caspase-3的表達(dá),旨在闡明維A酸注射液抗肝癌的作用及其可能機(jī)制,為其臨床應(yīng)用于肝癌的治療提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:(1)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SMMC-7721細(xì)胞,用不同濃度的維A酸注射液(終濃度分別為100μg/m

2、L、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL、6.25μg/mL、3.125μg/mL)干預(yù)48小時(shí),陰性對(duì)照為等體積培養(yǎng)基,陽(yáng)性對(duì)照為抗癌藥順鉑(cisplatin, DDP,終濃度分別為10μg/mL、1μg/mL、0.1μg/mL),采用CCK-8試劑盒(Cell Counting Kit-8)檢測(cè)對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖的影響;(2)建立人肝癌細(xì)胞SMMC-7721裸鼠移植瘤模型,在接種后第15天,去除移植瘤

3、未生長(zhǎng)或移植瘤生長(zhǎng)過(guò)緩、過(guò)速的裸小鼠。選擇體內(nèi)已形成瘤塊且瘤徑約≥50 mm3的裸鼠,按實(shí)驗(yàn)方案隨機(jī)分為5組給藥。分別為陰性對(duì)照組(生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照組(DDP,1mg/kg)和維A酸注射液低、中、高三個(gè)劑量組(7.5mg/kg、15mg/kg、30mg/kg)。采用腹腔注射給藥,每周連續(xù)給藥5天后停藥2天,共給藥4周。每周測(cè)量瘤徑和體重3次,計(jì)算腫瘤體積(tumor volume, TV)、相對(duì)腫瘤體積(relative tumor

4、 volume, RTV)和相對(duì)腫瘤增殖率[T/C(％)],以檢測(cè)對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721裸鼠移植瘤腫瘤生長(zhǎng)的影響;(3)荷瘤裸鼠連續(xù)給藥4周后停藥l天,再予脫頸處死,取出皮下移植瘤,用10％中性多聚甲醛固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,4 mm厚連續(xù)切片,脫蠟水化,以TUNEL法檢測(cè)腫瘤組織細(xì)胞凋亡,免疫組化檢測(cè)腫瘤組織caspase-3的表達(dá)。結(jié)果:(1)維A酸注射液隨著濃度的增加,對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721增殖的抑制作用增強(qiáng),

5、呈現(xiàn)出較好的量效關(guān)系,IC50為(15.14±0.46)μg/mL;(2)維A酸注射液治療組與陽(yáng)性對(duì)照組(DDP)均能不同程度抑制人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤的生長(zhǎng),腹腔注射給藥后,TV、RTV和T/C％明顯下降,T/C(％)均小于60％,且與陰性對(duì)照組(生理鹽水)比較,P<0.05。與DDP可以減輕祼鼠體重不同,維A酸注射液治療后裸鼠體重均沒(méi)有明顯減輕,揭示其毒性較小;(3)TUNEL法檢測(cè)結(jié)果顯示,陽(yáng)性細(xì)胞胞核呈棕褐色著

6、色,部分細(xì)胞表現(xiàn)為核固縮或碎裂,染色質(zhì)分割成塊狀或凋亡小體。維A酸注射液治療組凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率明顯高于陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),陽(yáng)性對(duì)照順鉑對(duì)細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響,凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率低,與陰性對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05);免疫組化結(jié)果顯示,與陽(yáng)性對(duì)照順鉑不同,維A酸注射液治療組腫瘤細(xì)胞均有caspase-3表達(dá),胞漿呈現(xiàn)不同程度的棕黃色顆料,caspase-3表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于陽(yáng)性對(duì)照順鉑和陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(