Rho GTP酶在白血病細胞行為異常及與骨髓微環(huán)境相互作用異常中的意義.pdf

1、造血微環(huán)境是維持造血干細胞自我更新潛能、制約細胞過度增殖、確保子細胞有序分化的重要場所，骨髓微環(huán)境中造血干細胞與基質細胞的粘附及細胞遷移的有序狀態(tài)決定了造血干細胞的正常發(fā)育，有序狀態(tài)的破壞使造血干細胞逃離微環(huán)境的制約，可能導致造血干細胞自我更新失衡及白血病細胞惡性行為的獲得。
　　 Rho GTP酶是Ras超家族中小分子量G蛋白的成員之一，是一類分子量為20～30kD的GTP結合蛋白。Rho GTP酶家族是連接細胞外信號與肌動蛋

2、白細胞骨架系統(tǒng)的關鍵因子，是調控細胞極性化和細胞骨架重塑的關鍵蛋白，調控著肌動蛋白細胞骨架的動力學。細胞黏附喪失及啟動遷移的細胞內在分子機制是Rho GTP酶的上調和活化。為確定骨髓微環(huán)境與造血細胞相互作用異常在白血病中的作用，我們以Rho GTP酶家族成員為研究對象，通過確定Rho GTP酶家族成員RhoA、Racl及CDC42在白血病細胞的表達異常，及Racl的高表達及活化在白血病細胞行為異常及在白血病細胞與骨髓微環(huán)境相互作用異常中

3、的意義，以闡明其在白血病發(fā)生中的作用，具體研究內容如下：
　　 1.白血病患者RhoA、Racl和CDC42的蛋白表達：應用Western-blot方法檢測88例急性白血病患者和22例正常骨髓移植供者骨髓單個核細胞的Racl相對表達水平，同時檢測54例急性白血病RhoA和CDC42的相對表達水平，發(fā)現(xiàn)與正常人相比，白血病患者RhoA、Racl和CDC42表達升高，非配對t檢驗進行統(tǒng)計學分析，均具有統(tǒng)計學差異（P<0.01）。

4、r>　　 2.Racl的高表達在白血病細胞行為中的作用：通過小RNA方法干擾白血病細胞系KGl-a和HL-60細胞內Racl的表達，測定干擾后細胞的遷移及增殖能力，結果發(fā)現(xiàn)，細胞的遷移、增殖及集落形成能力均降低。
　　 3.Racl-GTP酶的活化在白血病細胞中的作用：采用Rac的特異性抑制劑處理白血病細胞，測定細胞的遷移及增殖能力，結果顯示，細胞的遷移和增殖能力均顯著降低，從而證實白血病細胞中Racl-GTP酶的活化與白血病

5、細胞遷移活躍及增殖旺盛有關。進一步我們構建表達組成性活化型Racl的慢病毒載體和表達負顯性抑制型Racl的慢病毒載體，將慢病毒感染KGl-a細胞。GST-pull down實驗確定了病毒感染的細胞內Racl-GTP酶的水平活化后，對感染細胞的生物學功能進行了檢測，結果發(fā)現(xiàn)感染組成性活化型Racl慢病毒載體的KG1-a細胞的遷移能力增強，對VP16的耐藥性增加，在骨髓基質細胞上粘附能力明顯降低、遷移活躍；感染負顯性抑制型Racl慢病毒載體