缺血再灌注致結(jié)腸動(dòng)力動(dòng)態(tài)損傷動(dòng)物模型的研究.pdf

1、目的：
　　 胃腸的運(yùn)動(dòng)功能是消化系統(tǒng)最主要的生理功能之一。臨床上將脘腹脹滿,惡心,嘔吐,噯氣,腹瀉便秘為主要表現(xiàn)或伴有精神不佳,四肢乏力等癥狀者歸屬中醫(yī)脾胃病范疇。有實(shí)驗(yàn)研究表明,缺血再灌注可以導(dǎo)致大鼠精神萎靡、活動(dòng)欠佳、毛色晦暗、腹部脹滿并出現(xiàn)胃腸動(dòng)力障礙,提示缺血再灌注模型在一定程度上模擬了中醫(yī)理論中焦壅塞,氣機(jī)淤滯,脾氣下陷,胃氣上逆所致的脾胃升降失常的臨床表現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)分別建立腸系膜上動(dòng)脈缺血再灌注模型和肢體缺血再灌注動(dòng)

2、物模型,以不同缺血時(shí)間和不同再灌注時(shí)間進(jìn)行分組。通過對(duì)大鼠腸黏膜及主要臟器病理形態(tài)觀察；結(jié)腸平滑肌肌條收縮振幅及結(jié)腸平滑肌細(xì)胞Ca2+-ATP酶活力的檢測(cè),比較兩種造模方法對(duì)結(jié)腸動(dòng)力損傷的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,并篩選適合的胃腸動(dòng)力障礙模型,有助于今后探索臨床不同階段胃腸動(dòng)力障礙性疾患的最佳給藥時(shí)間與合理用藥,提供實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、建立腸系膜上動(dòng)脈缺血再灌注動(dòng)物模型:利用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉大鼠腸系膜上動(dòng)脈:統(tǒng)一缺

3、血45min,依據(jù)不同再灌注時(shí)間分為:再灌注6h組、再灌注24h組、再灌注48h組(C45-6、C45-24、C45-48)；統(tǒng)一再灌注時(shí)間48h,依據(jù)不同缺血時(shí)間進(jìn)行分為:缺血60min組、缺血75min組(C60-48、C75-48)。
　　 2、建立肢體缺血再灌注動(dòng)物模型:采用統(tǒng)一300g拉力橡皮筋束縛大鼠雙側(cè)大腿腹股溝處,環(huán)繞結(jié)扎3周,持續(xù)缺血3小時(shí)后,迅速解除結(jié)扎,進(jìn)行肢體再灌注,按照再灌注時(shí)間不同分為:12h組、18

4、h組、24h組(Z3-12、Z3-18、Z3-24)。
　　 3留取小腸、結(jié)腸及心臟、肺臟、腎臟,進(jìn)行HE染色,光鏡下觀察其病理變化,計(jì)數(shù)小腸絨毛正常分型的比例,測(cè)量小腸黏膜厚度及絨毛高度。
　　 4制備大鼠離體結(jié)腸平滑肌肌條,通過對(duì)大鼠結(jié)腸平滑肌肌條收縮波平均振幅的檢測(cè),探討不同時(shí)間點(diǎn)結(jié)腸平滑肌收縮波振幅動(dòng)態(tài)變化的規(guī)律。
　　 5制各大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞,運(yùn)用定磷法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ca2+-ATP酶活力,探討不同缺血再

5、灌注模型結(jié)腸平滑肌細(xì)胞Ca2+-ATP酶活力的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、腸系膜上動(dòng)脈缺血再灌注模型組:統(tǒng)一缺血45min組,在延長(zhǎng)再灌注時(shí)間后小腸黏膜病理出現(xiàn)形態(tài)改變,但正常絨毛分型比例、黏膜厚度絨毛高度與空白對(duì)照組均無差異(P>0.05),結(jié)腸平滑肌肌條收縮波振幅于再灌注6h、24h呈下降,再灌注48h后上升的趨勢(shì),與空白對(duì)照組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。統(tǒng)一再灌注48h組,缺血時(shí)間由45min延長(zhǎng)至60mi

6、n后,小腸黏膜正常絨毛分型比例、絨毛高度、黏膜厚度均較空白對(duì)照組呈有意下降(P<0.05),結(jié)腸平滑肌肌條收縮振幅下降(P<0.05)；延長(zhǎng)缺血時(shí)間至75min結(jié)腸腸壁變薄,肌張力差,不能耐受1g前負(fù)荷,無法測(cè)量其振幅。模型各組結(jié)腸黏膜部分出現(xiàn)輕度病理改變。缺血75min組結(jié)腸平滑肌細(xì)胞Ca2+-ATP酶活力較空白對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 2、肢體缺血再灌注模型各組:小腸粘膜均出現(xiàn)病理形態(tài)的改變,正常絨毛分型比

7、例、絨毛高度、絨毛厚度均較空白對(duì)照組呈有意下降(P<0.05)。隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)各組小腸黏膜病理損傷呈有意下降(P<0.05),各組心臟、肺臟、腎臟均出現(xiàn)不同程度的病理損傷。肢體缺血再灌注12h、18h組結(jié)腸平滑肌肌條收縮波振幅均低于空白對(duì)照組(P<0.05,P<0.01)；再灌注24h結(jié)腸平滑肌變薄,彈性差,不能耐受1g前負(fù)荷拉力,無法測(cè)量其振幅。模型各組結(jié)腸黏膜部分出現(xiàn)了病理改變。肢體缺血再灌注12h組結(jié)腸平滑肌細(xì)胞Ca2+-ATP