耳蝸缺血-再灌注損傷動物模型的建立及心鈉素對該損傷的影響.pdf

1、目的: 使用血栓/溶栓方法建立耳蝸缺血/再灌注動物模型，為臨床內(nèi)耳微循環(huán)障礙疾病的研究提供較為理想的實(shí)驗(yàn)動物模型；在該模型基礎(chǔ)上，觀察缺血/再灌注對聽覺器官形態(tài)及其功能的影響；觀察ANP的應(yīng)用對耳蝸功能的影響，掌握ANP應(yīng)用的時機(jī)，了解心鈉素對缺血再灌注耳蝸損傷的改善作用，為建立有效的治療奠定基礎(chǔ)。 方法: 1.隨機(jī)將豚鼠分為5組：正常組、手術(shù)組、血栓組、溶栓組、對照組。手術(shù)經(jīng)顱底暴露小腦前下動脈(AICA)，使

2、用FeCl3溶液誘導(dǎo)AICA形成血栓，建立缺血模型；頸外靜脈注射尿激酶(UK)以溶解血栓，建立再灌注模型。對照組在血栓誘導(dǎo)形成后，給予等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)過程中監(jiān)測耳蝸血流(CoBF)、實(shí)驗(yàn)前后測量聽性腦干反應(yīng)(ABR)值，血栓組及溶栓組AICA病理切片HE染色觀察血栓形態(tài)。 2.隨機(jī)將豚鼠分為5組：正常組、缺血30min組、缺血30min再灌注組、缺血60min組、缺血60min再灌注組。模型制作方法同前，實(shí)驗(yàn)過程中監(jiān)測耳蝸血流

3、(CoBF)，實(shí)驗(yàn)前后測量豚鼠聽性腦干反應(yīng)(ABR)值、畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射(DPOAE)值，實(shí)驗(yàn)后耳蝸基底膜鋪片硝酸銀染色，光鏡觀察。 3.隨機(jī)將豚鼠分為4組：實(shí)驗(yàn)組(A1、B1)及對照組(A2、B2)。模型制作方法同前。實(shí)驗(yàn)組A1在建模前10min靜脈注射心鈉素，實(shí)驗(yàn)組B1在再灌注即刻靜脈注射心鈉素，對照組(A2、B2)在相應(yīng)時間靜脈注射等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)過程中監(jiān)測CoBF，并測定ABR值。 結(jié)果: 1.血栓組、

4、溶栓組和對照組實(shí)驗(yàn)后ABRⅢ波反應(yīng)閾均比實(shí)驗(yàn)前有明顯提高，正常組和手術(shù)組實(shí)驗(yàn)前后無明顯統(tǒng)計學(xué)變化。血栓組、溶栓組及對照組在FeCl3誘導(dǎo)后，CoBF值下降至誘導(dǎo)前約30％，溶栓組在用UK后，CoBF值恢復(fù)到誘導(dǎo)前約70％。AICA切片HE染色，可見血栓組AICA有明顯白色血栓形成，成分為纖維素、血小板及紅細(xì)胞；溶栓組可見血栓模糊不清，形態(tài)較血栓組稀薄。 2.缺血時間越長，ABR閾值越高，各頻率DPOAE幅值下降越明顯，毛細(xì)胞破壞

5、越嚴(yán)重。缺血時間相等時，再灌注組ABR閾值高，DPOAE幅值下降明顯，毛細(xì)胞破壞嚴(yán)重。外毛細(xì)胞較內(nèi)毛細(xì)胞更易受影響。 3.缺血前實(shí)驗(yàn)組A1的CoBF較對照組A2高，再灌注后至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，兩組CoBF值未見明顯差別。實(shí)驗(yàn)組B1和對照組B2用藥前的CoBF無明顯差別，再灌注后對照組B2恢復(fù)到實(shí)驗(yàn)開始時的70％左右，而實(shí)驗(yàn)組B1恢復(fù)到實(shí)驗(yàn)開始時相同水平。缺血前4組聽閾無差別。缺血30min時，實(shí)驗(yàn)組A1的聽閾較對照組A2低，實(shí)驗(yàn)組B1和

6、對照組B2聽閾無差別。再灌注30min和60min時，實(shí)驗(yàn)組A1與對照組A2無明顯差別，實(shí)驗(yàn)組B1比對照組B2顯著降低。 結(jié)論: 1.應(yīng)用FeCl3誘導(dǎo)AICA血栓形成并用UK溶解的方法，可以制備內(nèi)耳缺血/再灌注模型，為臨床內(nèi)耳微循環(huán)障礙疾病的研究提供較理想的實(shí)驗(yàn)動物模型。 2.血栓/溶栓方法制備的缺血/再灌注模型，從組織學(xué)及電生理學(xué)方面，均引起耳蝸的缺血再灌注損傷：缺血時間越長，損傷越重；缺血時間相等時，再灌注