CD40單克隆抗體活化DC疫苗誘導(dǎo)CTL對結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的免疫治療研究.pdf

1、研究背景：結(jié)腸癌是臨床常見腫瘤，肝臟轉(zhuǎn)移已成為結(jié)腸癌患者死亡的主要因素。目前，針對結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的治療方法主要包括手術(shù)(栓塞、射頻消融)、放療、化療等，但單一方法均不能有效地逆轉(zhuǎn)患者的荷瘤狀態(tài)，故結(jié)腸癌肝臟轉(zhuǎn)移以綜合治療為主，而近年來作為結(jié)腸癌肝臟轉(zhuǎn)移綜合治療方法之一的過繼細胞免疫療法(ACI)日漸受到人們的關(guān)注。國內(nèi)外最新研究表明，激動型CD40單克隆抗體(CD40mAb)可逆轉(zhuǎn)腫瘤的免疫抑制、增強DCs介導(dǎo)的T細胞抗腫瘤作用。然而，將

2、激動型CD40單克隆抗體應(yīng)用于結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移過繼細胞免疫治療，以增強細胞免疫治療效果的研究，國內(nèi)外尚未見報道。
　　研究目的：應(yīng)用激動型CD40單克隆抗體誘導(dǎo)樹突狀細胞(DC)，研究其增強腫瘤抗原特異性細胞毒T淋巴細胞(CTL)對小鼠結(jié)腸癌細胞的體外殺傷及對小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的免疫治療作用。
　　研究方法：1)通過脾包膜下注射法，將小鼠結(jié)腸癌細胞CT-26注射至小鼠脾臟包膜下構(gòu)建小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型。2)取正常小鼠脾臟，以小鼠淋

3、巴細胞分離液分離和提取小鼠淋巴細胞，貼壁細胞和未貼壁細胞分別誘導(dǎo)培養(yǎng)；貼壁的DCs以小鼠結(jié)腸癌CT-26細胞裂解產(chǎn)物負載，培養(yǎng)過程中用或不用小鼠激動型CD40單克隆抗體(CD40mAb)激活DCs成熟。3)成熟的DCs與同源的未貼壁細胞共育，加入細胞因子，分別獲得CTLCD40Ab和CTL。4)培養(yǎng)過程中觀察細胞形態(tài)和活性，細胞計數(shù)檢測各組CTLs增殖情況，LDH法檢測各組CTLs對小鼠結(jié)腸癌CT-26細胞的體外殺傷，分析各組殺傷效果。

4、5)連續(xù)尾靜脈注射生理鹽水、CD40mAb、CTLCD40Ab和CTL(1次/周，共3次)對小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型進行治療，分析抑瘤效果。
　　研究結(jié)果：1)成功構(gòu)建小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型，成瘤率86.7％(13/15)，病理結(jié)果符合結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移特點。2)光鏡觀察CTLCD40Ab的細胞數(shù)量和集落較CTL細胞為多，且細胞密度、單細胞體積更大；細胞計數(shù)顯示，CTLCD40Ab細胞較CTL細胞增殖明顯，其中以CTLCD40Ablug/ml

5、細胞增殖最為明顯。3)10:1效靶比下，CTLCD40Ablug/ml、CTLCD40Ab5ug/ml及CTL組細胞對小鼠結(jié)腸癌CT-26細胞的殺傷率分別為65％、53％和29％，且CTLCD40Ablug/ml和CTLCD40Ab5ug/ml組殺傷率較CTL組顯著增高(P<0.05)。4)體內(nèi)抑瘤顯示：CD40Ab組、CTL組和CTLCD40Ag組抑瘤率分別為(23.1±12.5)％、(53.8±9.8)％和(64.6±10.2)％；

6、與對照組小鼠瘤重相比，CTL和CTLCD40Ag組小鼠瘤重顯著降低(P<0.05)，CTLCD40A組較CD40Ab組亦顯著降低(P<0.05)，而CTL組和CTLCD40Ag組之間，以及CTL組和CD40Ag組之間瘤重?zé)o顯著差異(P=0.089；P=0.077)；組織病理切片示，CTL和CTLCD40Ag治療組小鼠腫瘤區(qū)域有大量淋巴細胞浸潤。
　　研究結(jié)論：1)本研究制備的小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型致瘤率高、安全穩(wěn)定，真實的模擬了人結(jié)

7、腸癌肝臟轉(zhuǎn)移病理過程，且制備技術(shù)簡便、可操作性強，對結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)與臨床研究有較好的應(yīng)用價值。2)激動型CD40Ab在體外可活化和激活腫瘤抗原負載DCs，并通過活化的DCs作用于T細胞，從而顯著增強腫瘤特異性細胞毒T淋巴細胞(CTLs)的增殖活性和在體外對腫瘤細胞的殺傷活性。3)在體內(nèi)，通過激動型CD40Ab活化腫瘤抗原負載DCs并進而制備的腫瘤特異性細胞毒T淋巴細胞(CTLs)可顯著抑制小鼠肝臟轉(zhuǎn)移性腫瘤的生長，且激動型CD40A