2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩111頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
  第一部分 ACE2基因敲除加重高脂誘導的糖尿病前期小鼠胰島β細胞及內(nèi)皮細胞損害
  目的:通過長期高脂飲食喂養(yǎng)誘導糖尿病前期模型,觀察血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)基因缺失對糖尿病前期小鼠胰島β細胞及胰島內(nèi)皮細胞的影響。
  方法:ACE2基因敲除小鼠及野生型C57小鼠均分為普通飲食(WT,KO)組和高脂飲食(WH,KH)組,喂養(yǎng)16周后,取四組小鼠胰腺行免疫熒光觀察小鼠胰島內(nèi)胰島

2、內(nèi)皮細胞標志物CD31、Insulin的表達變化。免疫組化染色法檢測胰島內(nèi)VEGF、凋亡蛋白Caspase-3及氧化應激標志物iNOS的表達變化。分離純化小鼠胰島,RT-PCR法檢測胰島內(nèi)炎癥因子TNF-α及IL-1βmRNA的相對表達量。體外培養(yǎng)分離純化的KH組小鼠的胰島細胞團,給予Ang(1-7)干預重建RAS平衡,觀察胰島細胞分泌功能的改變。
  結(jié)果:在正常飲食條件下,與野生型小鼠(WT組)相比,ACE2基因敲除(KO組)

3、小鼠胰島內(nèi)胰島素相對含量(IRC)和胰島素陽性細胞核密度(ICD)無明顯的變化。與WT組相比,給予16周高脂飲食后, WH組小鼠胰島內(nèi)胰島素相對含量和胰島素陽性細胞核密度明顯減少(P<0.05),同時伴隨胰島局部Caspase-3、iNOS表達增加(P<0.05),胰島內(nèi)TNF-α及IL-1βmRNA表達增加(P<0.05),提示高脂飲食誘導的糖尿病前期小鼠胰島功能受損,胰島局部炎癥反應和氧化應激反應增強。與WH組相比,KH組小鼠胰島內(nèi)

4、胰島素表達進一步減少(P<0.05),胰島局部Caspase-3、iNOS及 TNF-α和IL-1βmRNA表達增加(P<0.05),提示ACE2基因缺失加重了糖尿病前期小鼠胰島內(nèi)炎癥和氧化應激反應,胰島功能一進步受損。分離KH組小鼠的胰島,體外給予Ang(1-7)干預后,其GSIS功能改善(P<0.05)。
  在正常飲食條件下,野生型小鼠(WT組)和ACE2基因敲除小鼠(KO組)胰島內(nèi)CD31陽性細胞表達無明顯改變。高脂飲食喂

5、養(yǎng)16周后,WH組CD31陽性細胞明顯增多(P<0.05),VEGF表達增加(P<0.05),提示糖尿病前期小鼠胰島內(nèi)皮細胞代償性增多。在高脂飲食條件下,與WH組相比,KH組小鼠胰島內(nèi)CD31陽性表達顯著減少(P<0.05), VEGF表達減少(P<0.05),提示ACE2基因敲除導致糖尿病前胰島內(nèi)皮細胞減少,胰島微循環(huán)失代償。
  結(jié)論:ACE2基因缺失加重糖尿病前期小鼠胰島局部的應激反應,胰島內(nèi)皮細胞減少,胰島功能損害。

6、>  第二部分 Ang(1-7)對胰島內(nèi)皮細胞系MS-1細胞功能的影響及機制研究
  目的:探討Ang(1-7)干預上調(diào) ACE2-Ang(1-7)-Mas軸對生理及高脂培養(yǎng)條件培養(yǎng)的胰島內(nèi)皮細胞功能的影響及保護作用。
  方法:體外培養(yǎng)胰島內(nèi)皮細胞系MS-1細胞,給予Ang(1-7)干預后硝酸還原酶法檢測NO濃度的變化,Western blot檢測Akt-eNOS信號通路活性的改變。棕櫚酸及Ang(1-7)干預后檢測MS-

7、1細胞Akt-eNOS-NO信號通路活性的變化及細胞內(nèi)ROS的水平及凋亡改變。
  結(jié)果:在生理條件下,與對照組相比, Ang(1-7)時間依賴性的增加 MS-1細胞內(nèi)Akt-eNOS-NO信號通路活性,表現(xiàn)為AKT、eNOS磷酸化水平增加(P<0.05),細胞生成NO增多(P<0.05),同時給予wortmannin或L-NAME干預后抑制了NO的生成(P<0.05)。Ang(1-7)在MS-1細胞中活化Akt-eNOS-NO通

8、路的效應被A779阻斷(P<0.05),提示上調(diào)ACE2-Ang(1-7)-Mas軸后,MS-1細胞功能改善。
  棕櫚酸培養(yǎng)24h后,MS-1細胞內(nèi)ACE2-Ang(1-7)-Mas軸下調(diào),表現(xiàn)為ACE2及Mas受體表達均降低(P<0.05),而ACE-AngII-AT1軸活性增強,ACE及AT1受體表達增加(P<0.05)。與對照組相比,高脂組MS-1細胞內(nèi)Akt、eNOS磷酸化水平降低(P<0.05), NO生成減少(P<0

9、.05),ROS產(chǎn)生增多(P<0.05),細胞凋亡增加(P<0.05)。與高脂組相比,高脂同時給予Ang(1-7)干預后,細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生減少(P<0.05),Akt、eNOS磷酸化水平增加,NO生成增多,MS-1細胞凋亡明顯下降(P<0.05)。而同時加入PI3K或eNOS特異性阻斷劑wortmannin或L-NAME后,Ang(1-7)抗脂性凋亡的作用被阻斷(P<0.05)。
  結(jié)論:Ang(1-7)上調(diào)MS-1細胞內(nèi)Akt

10、-eNOS-NO信號通路活性,改善MS-1細胞功能。高脂條件下,Ang(1-7)通過上調(diào)Akt-eNOS-NO通路,拮抗ACE-AngⅡ-AT1軸活性,減少細胞內(nèi)氧化應激水平,改善MS-1細胞功能,減少脂性凋亡。
  第三部分 Ang(1-7)介導的胰島內(nèi)皮細胞對高脂培養(yǎng)的β細胞系MIN6細胞的調(diào)節(jié)效應及機制探討
  結(jié)果與MIN6組相比,MIN6+PA組MIN6細胞的基礎(chǔ)胰島素分泌升高(P<0.05),而GSIS顯著降低(

11、P<0.05),Co-culture組GSIS有增加,但差異未達到統(tǒng)計學意義。與MIN6+PA組相比,Co-culture+A組基礎(chǔ)胰島素分泌無顯著變化,但GSIS明顯改善(P<0.05),同時檢測到MIN6細胞內(nèi)胰島素mRNA表達增加。高脂培養(yǎng)后,MIN6細胞內(nèi)AKT磷酸化水平顯著降低(P<0.05)。與MIN6+PA組相比,Co-culture組AKT磷酸化水平增加,但差異無統(tǒng)計學意義,Co-culture+A組AKT磷酸化水平顯著

12、增加(P<0.05),提示Ang(1-7)可能通過MS-1細胞保護MIN6細胞內(nèi)胰島素信號通路免受高脂損害,改善其分泌功能。棕櫚酸干預后MIN6細胞的凋亡明顯增加(P<0.05),同時檢測到細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生顯著增加(P<0.05),P65蛋白表達增加(P<0.05),JNK、P38磷酸化水平上升(P<0.05)。與MIN6+PA組相比,Co-culture組MIN6細胞凋亡減少,ROS濃度及P65、JNK、P38的表達降低,而Co-cu

13、lture+A組凋亡率明顯降低(P<0.05),MIN6細胞內(nèi)ROS濃度及P65、JNK、P38的表達降低較Co-culture組進一步降低,提示Ang(1-7)通過改善MS-1細胞功能,減輕高脂誘導的應激反應,減少MIN6細胞脂性凋亡。
  目的:體外以Ang(1-7)及Mas干預的不同狀態(tài)的胰島內(nèi)皮細胞與高脂干預的β細胞共培養(yǎng),研究ACE2-Ang(1-7)-Mas通路介導的胰島內(nèi)皮功能對β細胞功能的調(diào)節(jié)效應。
  方法

14、:體外建立共培養(yǎng)模型,棕櫚酸孵育48h的MIN6細胞與Ang(1-7)及Mas干預的MS-1細胞共培養(yǎng),分組為:對照組(MIN6組);棕櫚酸干預組(MIN6+PA組);共培養(yǎng)(A分Co-culture組);與Ang(1-7)孵育過的MS-1細胞共培養(yǎng)組(Co-culture+A組);與ng(1-7)及A779孵育過的MS-1細胞共培養(yǎng)組(Co-culture+A+7組)。檢測MIN6細胞的泌功能,RT-PCR檢測胰島素mRNA的表達,D

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論