蘇中地區(qū)豬鏈球菌分子流行病學調查及豬鏈球菌2型反應調控因子RevS缺失株的構建.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis，SS)是重要的人獸共患病的病原，能引起豬和人類的腦膜炎、敗血癥以及突發(fā)性死亡，對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。根據(jù)莢膜多糖(capsular polysaccharide，CPS)抗原性差異，可將SS分為35個血清型(1～34，1/2)，主要致病血清型為SS1、SS2、 SS7和SS9，其中SS2流行最廣、致病性最強。國內研究報導主要以SS2為主，其他致病血清型分布和致病作用不明。就SS2而言

2、，不同菌株致病性強弱與其是否攜帶和表達毒力相關因子有關，但其致病機制不明。本研究對蘇中地區(qū)正常豬群豬鏈球菌主要致病血清型攜帶情況進行調查，對分離菌株毒力因子表型、耐藥性和致病性等進行系統(tǒng)鑒定；同時，通過同源重組方法構建了四川強毒株05ZYH33的反應調節(jié)因子尺RevS基因缺失突變株，初步闡明了該反應調控因子對國內毒力株致病性的影響。 1、蘇中地區(qū)豬鏈球菌主要致病血清型分子流行病學調查，2005年、2006年從蘇中地區(qū)采集正常屠

3、宰豬樣本共303份，以豬鏈球菌種16S rRNA特異性引物及血清型1型、2型、7型、9型莢膜多糖型特異性引物，用PcR方法進行豬鏈球菌及主要致病血清型的檢測。2005年200頭健康豬樣本中，有176份為16S rRNA陽性，SS檢出率為88％；在176份16S rRNA陽性樣本中，1型、2型、7型、9型檢測陽性標本數(shù)分別為17、15、20、52，檢出率分別為9.6％、8.5％、11.3％、29.5％。2006年103頭健康豬樣本中，85

4、份樣本檢測為16S rRNA陽性，SS檢出率為82.5％，85份16S rRNA陽性樣本中1型、2型、7型、9型檢測陽性標本數(shù)分別為15、2、22、17，檢出率分別為17.6％、2.3％、25.8％、20％。調查表明，該地區(qū)正常豬群中豬鏈球菌攜帶率處于較高水平，且多種血清型同時存在。 2、豬鏈球菌2型、7型和9型菌株的分離鑒定通過PCR初篩和平板法分離到豬鏈球菌2型3株、豬鏈球菌7型3株和豬鏈球菌9型13株。生化試驗結果顯示所

5、有菌株符合豬鏈球菌的生化特征。所有分離菌株對青霉素G、紅霉素、萬古霉素素敏感，但對四環(huán)素耐藥，其中分離株58c呈多重耐藥，分別對四環(huán)素、鏈霉素、磺胺類藥、紅霉素和克林霉素均耐藥。主要毒力因子檢測結果顯示，所有菌株gdh均呈陽性，mrp、epf、sly、fbp呈陰性，orf2在各菌株中的分布有差異，其毒力因子表型與歐洲分離株不同，與國內暴發(fā)流行毒株的毒力因子表型差異顯著。 3、豬鏈球菌 2 型反應調控因子RevS缺失株的構建20

6、02年Greeff首次報導反應調節(jié)因子(response regulator)RPvS基因敲除的SS2在豬各組織器官中的定植能力減弱，作用機制不明。為探討RevS基因對05ZYH33致病性的影響及其可能的機制，本研究構建中間為壯觀霉素抗性基因，兩側為RevS編碼基因上、下游同源序列的基因敲除載體，通過同源重組和PCR法鑒定，獲得RevS編碼基因完全被壯觀霉素抗性基因替代的突變株。該基因敲除后細菌的穩(wěn)定性、生長曲線、菌落形態(tài)、溶血性、染色