Ⅱ型豬鏈球菌毒力因子基因的鑒定及其表達(dá)調(diào)控.pdf

1、本研究以Ⅱ型豬鏈球菌(Streptococcus suis serotype 2，SS<,2>)中國(guó)上海分離株CVCC606和日本分離株CVCC607作為研究對(duì)象。 采用常規(guī)微生物鑒定方法，研究了兩個(gè)菌株的菌體、菌落形態(tài)，培養(yǎng)特性、溶血特性和生長(zhǎng)規(guī)律，繪制不同環(huán)境下Ⅱ型豬鏈球菌的生長(zhǎng)曲線。結(jié)果表明，兩菌株的菌體、菌落形態(tài)和培養(yǎng)特性基本相同，溶血性略不同，相同環(huán)境中生長(zhǎng)曲線相似，不同環(huán)境中生長(zhǎng)曲線變化趨勢(shì)基本相同，表明來(lái)源不同的兩

2、菌株的各方面特性一致。Ⅱ型豬鏈球菌不同的生長(zhǎng)曲線表明，溫度對(duì)該菌生長(zhǎng)影響較大，氣體環(huán)境對(duì)該菌生長(zhǎng)影響不大。 采用PCR方法檢測(cè)兩菌株毒力因子基因cps2j、mrp、epf、sly、orf2、hly和ofs的存在情況，并對(duì)各基因片段進(jìn)行了堿基序列分析。結(jié)果表明，兩菌株存在上述基因，其中首次證實(shí)Ⅱ型豬鏈球菌國(guó)內(nèi)分離株存在豬鏈球菌渾濁因子OFS基因；兩菌株各基因片段與己知豬鏈球菌的相應(yīng)片段的相似性較高。研究?jī)删阧ly和ofs的基因序

3、列發(fā)現(xiàn)：基因突變使hly基因提前終止，不能編碼完整透明質(zhì)酸酶，只產(chǎn)生截短多肽，推測(cè)不具有透明質(zhì)酸酶活性；兩株菌hly的編碼序列與Ⅱ型菌株的相應(yīng)序列相似性高，與其它血清型菌株相似性低；與國(guó)外的ofs的堿基和氨基酸序列比較，菌株ICVCC607與其相同，菌株CVCC606與其高度相似，證實(shí)國(guó)內(nèi)外分離株具有高度的相似性。 選擇溫度、CO<,2>濃度和振蕩或靜置培養(yǎng)，研究改變環(huán)境條件對(duì)該菌七個(gè)毒力因子基因表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，溫度和氣體

4、環(huán)境的改變影響Ⅱ型豬鏈球菌某些毒力因子基因的表達(dá)。該菌在同一環(huán)境中各毒力基因表達(dá)量不同，常規(guī)培養(yǎng)，hly、orf2和ofs基因的表達(dá)量高，cps2j和sly表達(dá)量低。從37℃降低到25℃，sly表達(dá)量變大；ofs表達(dá)量變小，表明低溫促進(jìn)sly表達(dá)，抑制ofs表達(dá)。在震蕩培養(yǎng)和含有20％CO<,2>的氣體環(huán)境下，hly和ofs表達(dá)量變小，表明較高含氧量和高濃度CO<,2>都會(huì)抑制hly和ofs表達(dá)；mrp和sly的表達(dá)量在震蕩培養(yǎng)時(shí)不變，