抗豬鏈球菌中藥的篩選及黃連抗豬鏈球菌作用機(jī)理的初步研究.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一種常見的致病菌，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)較大的損失。目前對(duì)豬鏈球菌主要選擇抗生素進(jìn)行治療，但是由于抗生素的不規(guī)范使用，使豬鏈球菌耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，治療效果較差。清熱解毒類中藥具有清熱、瀉火、涼血、解毒等作用，而且具有高效低毒、不容易產(chǎn)生耐藥性和有害殘留等優(yōu)點(diǎn)。本試驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)室保存的保定株(BD1)和秦皇島株(QHD1)兩株豬鏈球菌進(jìn)行培養(yǎng)，革蘭氏染色觀察，細(xì)菌形態(tài)為短鏈狀、橢圓形的結(jié)構(gòu)。D

2、NA提取并經(jīng)16S rDNA測(cè)序鑒定，確定兩株菌均為豬鏈球菌2型。采用動(dòng)物致病性試驗(yàn)篩選合適菌株，結(jié)果顯示BD1和QHD1兩菌接種昆明小鼠后不發(fā)病，處死后也未見內(nèi)臟病理變化。兩菌株肌肉注射接種仔豬，BD1組豬體溫最高達(dá)40℃，QHD1為39.8℃。血常規(guī)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞顯著增加，并且引起精神狀態(tài)先沉郁后好轉(zhuǎn)。BD1組后肢關(guān)節(jié)腫大及典型的間質(zhì)性肺炎或纖維素性肺炎，提示BD1細(xì)菌致病性高于QHD1，故選擇BD1進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。打孔法和試管二倍稀

3、釋法體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果檢出，黃連等42種中藥中有29種對(duì)豬鏈球菌有一定的抑菌作用，其中黃連水提物的抗菌活性最強(qiáng)，MIC與MBC均為0.98mg/mL。通過(guò)活菌計(jì)數(shù)法繪制最佳抑菌曲線，得出在BD1培養(yǎng)1h時(shí)，細(xì)菌生長(zhǎng)速率最快，在此時(shí)將終濃度為1/2MIC(0.49mg/mL)濃度黃連作用細(xì)菌，在培養(yǎng)1h后可以殺死90％細(xì)菌。將藥物作用前后編號(hào)分別為S.suis_0和S.suis_1的菌株進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，對(duì)S.suis_0與S.suis_1之

4、間的差異基因進(jìn)行GO功能和KEGG通路以及IPR功能富集分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃連作用前后共有30個(gè)基因的表達(dá)量發(fā)生顯著變化，其中23個(gè)基因表達(dá)量上調(diào)，7個(gè)基因表達(dá)量下調(diào)，并隨機(jī)選取了10個(gè)基因進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光PCR驗(yàn)證。與細(xì)菌能量利用有關(guān)的半乳糖異構(gòu)酶(GPI)和核糖-5-磷酸異構(gòu)酶B(RpiB)表達(dá)下調(diào)，磷酸酶轉(zhuǎn)移系統(tǒng)(PTS)系統(tǒng)表達(dá)下調(diào)。乳糖操縱子(lac)阻遏蛋白表達(dá)上調(diào)，與細(xì)菌突變有關(guān)的ClpP蛋白酶表達(dá)上調(diào)，轉(zhuǎn)座酶(TnpA)和噬菌