4NQO誘發(fā)小鼠舌和食管癌模型的建立及其免疫抑制細(xì)胞(Treg、MDSC)的初步分析.pdf

1、目的：本研究利用化學(xué)致癌劑4-硝基喹啉-1-氧化物（4NQO），通過(guò)飲水法誘發(fā)C57BL/6小鼠產(chǎn)生舌癌和食管鱗狀細(xì)胞癌，對(duì)小鼠病理形態(tài)進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，同時(shí)分析病變小鼠脾臟和外周血中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）以及髓源性抑制性細(xì)胞（MDSC）的改變。
　　 方法：（1）4NQO用1，2丙二醇配置成2％濃度的母液，再分別用滅菌自來(lái)水配置成100μg/ml，50μg/ml，10μg/ml的濃度通過(guò)飲水法作用于小鼠。105只8周齡的雌性C5

2、7BL/6小鼠隨機(jī)分成A、B、C、D四組，A組30只，B、C、D三組每組25只。A組飲100μg/ml4NQO濃度的水至16周時(shí)，改為飲用滅菌自來(lái)水觀察至第16、20、24、28、32周時(shí)每個(gè)時(shí)間段各處死5只。B組飲50μg/ml4NQO濃度的水至16周時(shí)，改為飲用滅菌自來(lái)水觀察至第16、20、24、28、32周時(shí)每個(gè)時(shí)間段各處死5只。C組飲10μg/ml4NQO濃度的水至16周時(shí)，改為飲用滅菌自來(lái)水觀察至第16、20、24、28、32

3、周時(shí)每個(gè)時(shí)間段各處死5只。D組為對(duì)照組小鼠，D組小鼠飲用含相同1，2丙二醇濃度的滅菌自來(lái)水至第16、20、24、28、32周時(shí)每個(gè)時(shí)間段也各處死5只小鼠作對(duì)對(duì)照。處死的小鼠取其舌頭、食管、脾臟組織標(biāo)本，進(jìn)行肉眼、病理組織學(xué)觀察其腫瘤發(fā)生發(fā)展情況。（2）在建模過(guò)程中，收集第0、1、2、4、12、16、20、24、28、32周A和D組小鼠的外周血以及脾臟細(xì)胞，每組每個(gè)時(shí)間段各收集三只小鼠的外周血和脾臟細(xì)胞。采用流式細(xì)胞技術(shù)的方法，測(cè)定其中C

4、D4+CD25+Treg細(xì)胞以及CD11b+Gr1+MDSC細(xì)胞的例和數(shù)量。
　　 結(jié)果：（1）50μg/ml、100μg/ml作用組的小鼠均出現(xiàn)明顯的病變特征，而10μg/ml作用組的小鼠和對(duì)照組小鼠相差無(wú)異，到32周時(shí)仍見(jiàn)不到病變的發(fā)生。對(duì)照組即D組小鼠舌粘膜呈粉紅色，舌乳頭分布均勻，無(wú)白色斑塊，潰瘍和新生物形成。（2）隨著觀察時(shí)間的延長(zhǎng)，A組和B組小鼠的舌粘膜相繼出現(xiàn)白色斑塊、潰瘍，糜爛，顆粒狀新生物及菜花狀新生物等改變；

5、而A組和B組小鼠的食管可見(jiàn)到有局部腫大，紅腫的癥狀。病理檢測(cè)顯示A組和B組小鼠舌粘膜和食管內(nèi)壁經(jīng)歷了單純性上皮增生-異常增生-原位癌--浸潤(rùn)性癌的經(jīng)典病理性變化：A組小鼠舌頭16周時(shí)主要表現(xiàn)為中輕度異常增生，20周時(shí)見(jiàn)到重度異常增生，24周時(shí)可見(jiàn)到原位癌，28周時(shí)可見(jiàn)到浸潤(rùn)性癌，32周時(shí)80％為浸潤(rùn)性癌。A組小鼠的食管16周時(shí)可見(jiàn)到中輕度異常增生，20周時(shí)可見(jiàn)到重度異常增生，28周時(shí)也可見(jiàn)到浸潤(rùn)性癌的產(chǎn)生；B組小鼠舌頭和食管發(fā)生著與A組

6、小鼠表觀類似的變化，只不過(guò)病理發(fā)展較為緩慢；C組小鼠舌頭和食管在實(shí)驗(yàn)期間均觀測(cè)不到異常變化，癥狀以及組織病理結(jié)果同對(duì)照組D組小鼠類似。（3）選擇A組小鼠和D組小鼠的外周血和脾臟淋巴細(xì)胞進(jìn)行流式檢測(cè)顯示，從第O周到第4周，兩組小鼠外周血和脾臟中的CD4+CD25+Treg和CD11b+Gr1+MDSC比例無(wú)明顯差別，而在第8周時(shí)，CD4+CD25+Treg和CD11b+Gr1+MDSC這兩者A組均呈現(xiàn)升高。至第16周時(shí)外周血中CD11b+

7、Gr1+MDSC的比例迅速上升，到32周時(shí)，在外周血中CD11b+Gr1+MDSC高于對(duì)照組5倍，Treg占CD4+T細(xì)胞的比例在16周時(shí)有明顯上升。
　　 結(jié)論：（1）通過(guò)4NQO飲水法，可誘發(fā)C57BL/6小鼠產(chǎn)生舌鱗狀細(xì)胞癌以及食管鱗狀細(xì)胞癌的病變，成功建立了舌癌和食管鱗狀細(xì)胞癌的疾病動(dòng)物模型。癌變的過(guò)程經(jīng)歷了單純性上皮增生-異常增生-原位癌-浸潤(rùn)性癌的經(jīng)典病理變化過(guò)程，該組織病理學(xué)特征與人相關(guān)疾病相似。同時(shí)，通過(guò)4NQO