KA活化的小膠質(zhì)細(xì)胞來源的TNFα對在體和離體海馬神經(jīng)元興奮毒性作用研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文KA活化的小膠質(zhì)細(xì)胞來源的TNFα對在體和離體海馬神經(jīng)元興奮毒性作用研究姓名：朱威申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：李正莉201005華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文2的活化，然后應(yīng)用OX42免疫染色觀察經(jīng)上述不同處理后MG的形態(tài)學(xué)變化；分別采用RTPCR和Westernblot法檢測MG內(nèi)TNFαmRNA和蛋白的表達(dá)情況；采用Elisa法檢測MG條件培養(yǎng)液內(nèi)TNFα的含量。

2、OX42免疫組化結(jié)果顯示，KA作用MG2hr后MG胞體增大、突起回縮呈阿米巴狀，OX42的免疫反應(yīng)較正常組和MCKA組明顯增強(qiáng)。結(jié)果顯示，MG內(nèi)TNFαmRNA和蛋白的含量在KA組明顯高于正常組；而在MCKA組則顯著低于KA組。Elisa檢測結(jié)果顯示，MG條件培養(yǎng)液中TNFα的含量在KA組明顯高于正常組；而MCKA組則明顯低于KA組。結(jié)果提示，KA對MG有顯著的激活作用，活化的MG合成、分泌TNFα顯著增多。MC預(yù)處理能抑制MG的活化進(jìn)

3、而拮抗KA對MG的上述效應(yīng)。第二部分第二部分KA活化的活化的MG條件培養(yǎng)液對海馬神經(jīng)元興奮性的影響及條件培養(yǎng)液對海馬神經(jīng)元興奮性的影響及TNFα抗體的拮抗效應(yīng)抗體的拮抗效應(yīng)海馬神經(jīng)元因具有自發(fā)放電，興奮閾值低等特征而與癲癇發(fā)病關(guān)系密切。中樞神經(jīng)病變時腦內(nèi)表達(dá)的各種炎性細(xì)胞因子能顯著影響海馬神經(jīng)元興奮狀態(tài)，其機(jī)制可能與激活神經(jīng)元上的相應(yīng)受體和離子通道有關(guān)。在第一部分的實(shí)驗(yàn)中，我們已經(jīng)證實(shí)活化的MG合成分泌TNFα顯著增多。為了進(jìn)一步探討K

4、A活化的MG條件培養(yǎng)液（KAMCM）對海馬神經(jīng)元的興奮作用及KAMCM內(nèi)的TNFα在這一事件中的重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過離體和在體實(shí)驗(yàn)，采用膜片鉗和誘發(fā)電位電生理技術(shù)、RT–PCR和Westernblot方法，研究KAMCM對海馬神經(jīng)元鈣電流、群峰電位、相關(guān)興奮性蛋白NMDAR1、iNOS的影響，并觀察TNFα抗體加入KAMCM后所產(chǎn)生的中和拮抗效應(yīng)。膜片鉗及群峰電位記錄表明，KAMCM能顯著增加海馬神經(jīng)元鈣電流密度；增強(qiáng)在體大鼠海馬CA3

5、區(qū)群峰電位。RT–PCR和Westernblot檢測表明KAMCM顯著增加海馬神經(jīng)元和海馬組織NMDAR1和iNOS的mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)，而預(yù)先在KAMCM中加入TNFα抗體則上述效應(yīng)明顯減弱。結(jié)果表明，活化的MG來源的TNFα對在體及離體的海馬神經(jīng)元具有極強(qiáng)的神經(jīng)興奮作用，由此提示它可能增加機(jī)體對癲癇發(fā)作及神經(jīng)元損傷的易感性。第三部分第三部分KA活化的活化的MG來源的來源的TNFα對海馬神經(jīng)元的促凋亡作用。對海馬神經(jīng)元的促凋亡作用。