小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)神經(jīng)元損傷在弓形蟲(chóng)腦炎中的研究.pdf

1、背景:
　　弓形蟲(chóng)是一種專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生蟲(chóng)原蟲(chóng),能感染所有的恒溫脊椎動(dòng)物。免疫功能正常的個(gè)體感染后表現(xiàn)為慢性感染,通常是無(wú)癥狀或者是良性自限性疾病。慢性感染者一旦出現(xiàn)免疫力低下,弓形蟲(chóng)隱性感染活化會(huì)導(dǎo)致致死性弓形蟲(chóng)腦炎。弓形蟲(chóng)腦炎也是免疫功能低下患者發(fā)病和死亡的一個(gè)主要原因。目前,弓形蟲(chóng)腦炎的病理?yè)p傷機(jī)制仍不十分清楚。小膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)駐地免疫細(xì)胞,在損傷、炎癥和病原體存的情況下被迅速激活?；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞釋放大量細(xì)胞炎癥因

2、子,這些細(xì)胞炎癥因子具有神經(jīng)毒性作用,可導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡。越來(lái)越多的證據(jù)支持,活化的小膠質(zhì)細(xì)胞在很多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中扮演至關(guān)重要的作用,然而,活化的小膠質(zhì)細(xì)胞是否參與了弓形蟲(chóng)腦炎的免疫病理過(guò)程至今未見(jiàn)報(bào)道。我們假設(shè)小膠質(zhì)細(xì)胞在感染弓形蟲(chóng)速殖子后產(chǎn)生的炎癥環(huán)境可能造成弓形蟲(chóng)腦炎中神經(jīng)元的損傷。
　　目的:
　　闡明小膠質(zhì)細(xì)胞在弓形蟲(chóng)腦炎免疫病理中的作用。為弓形蟲(chóng)腦炎的防治提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　本實(shí)驗(yàn)

3、首先建立弓形蟲(chóng)腦炎小鼠模型,利用免疫組化檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài),用RT-PCR和ELISA方法,對(duì)炎癥因子白介素-1β(nterleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(nterleukin-6,IL-6)和腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。蛋白免疫印跡和免疫熒光檢測(cè)誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)蛋白的表達(dá)。為

4、了檢測(cè)神經(jīng)元的凋亡情況,同時(shí)使用原位末端標(biāo)記方法,蛋白免疫印跡和免疫熒光檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　(1)在弓形蟲(chóng)腦炎組,我們發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞在皮層區(qū)和海馬區(qū)大量活化,IL-1β、IL-6和TNF-α表達(dá)水平增加,iNOS表達(dá)增強(qiáng)。神經(jīng)元凋亡水平明顯增加。
　　(2)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,弓形蟲(chóng)速殖子能夠有效誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化,并伴隨IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS表達(dá)增加。N2a細(xì)胞與被速殖子感染的小膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)

5、,N2a細(xì)胞凋亡水平顯著增加。
　　(3)在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中,米諾環(huán)素(小膠質(zhì)細(xì)胞活化抑制劑)處理后能顯著減少小膠質(zhì)細(xì)胞活化和神經(jīng)元凋亡。
　　結(jié)論:
　　在本研究中,我們的結(jié)果顯示弓形蟲(chóng)速殖子能誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化,活化的小膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)炎癥因子的表達(dá),這些變化伴隨著神經(jīng)元的凋亡。處理米諾環(huán)素后,不僅抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥因子的表達(dá),同時(shí)減少神經(jīng)元凋亡。綜上所述,小膠質(zhì)細(xì)胞的活化可能在弓形蟲(chóng)腦炎的病理中扮演重要作用,抑