馬立克氏病病毒感染雞胚成纖維細胞后4號染色上基因微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究.pdf

1、目的：微衛(wèi)星不穩(wěn)定性廣泛地應用于腫瘤病的檢測，但是應用微衛(wèi)星技術研究馬立克氏病病毒，致瘤型的病毒感染引起基因組變化的還未報道。本實驗通過應用馬立克氏病病毒的強毒株RB1B感染雞胚成纖維細胞后，應用雞4號染色體上20個微衛(wèi)星標記，旨在發(fā)現馬立克氏病病毒感染雞胚成纖維細胞是否引起基因微衛(wèi)星的改變，研究病毒感染早期階段的基因組變化，為此病的早期診斷提供線索。 方法：用雞4號染色體上20個微衛(wèi)星標記為引物。做雞胚成纖維細胞培養(yǎng)，獲得含實

2、驗和對照的32組樣本，提取細胞中的基因組DNA。利用20個微衛(wèi)星引物，以同源的自體作為對照進行PCR擴增，擴增產物，采用12％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染后觀察結果，觀察微衛(wèi)星條帶的改變。 結果：20個微衛(wèi)星標記，有18個標記發(fā)生不同百分率的MSI，18/20(90.00％)表現出微衛(wèi)星不穩(wěn)定性陽性，有2個標記沒有檢測到變化，占微衛(wèi)星標記2/20(10.00％)。檢測到MSI的微衛(wèi)星位點，表現出不同的百分率，4個位點發(fā)生較高的MS

3、I，這4個位點分別為：ABR0622，MCW0174，ADL0266，和ABR0382，MSI發(fā)生率分別為37.50％，31.75％，31.75％和31.75％。6個微衛(wèi)星標記，檢測到MSI發(fā)生率大于20％，占總微衛(wèi)星標記的6/20(30.00％)．微衛(wèi)星標記檢測到MSI較集中在15.00％-30.00％之間，此階段的微衛(wèi)星標記有8個，占總微衛(wèi)星標記的8/20(40.00％)。檢測到的微衛(wèi)星標記發(fā)生MSI最低為3.13％，這樣的位點僅有

4、2個，占微衛(wèi)星標記比率的2/20(10.00％)。 接種馬立克氏病病毒的雞胚成纖維細胞樣本有30/32(93.06％)表現出MSI．不同樣品MSI統計結果表明11號樣品，MSI發(fā)生率最高為45.00％。3號樣品的發(fā)生率也較高為35.00％；有16組樣本檢測到MSI+，占測樣本總量的16/32(50.00％)，有14組樣本檢測到低頻的MSI(MSI-L)，占總檢測樣本量的14/32(43.75％)，只有兩組沒有檢測到MSI變化表現