Cx43與Bax、Bcl-2在胎膜早破患者胎膜組織中的表達及意義.pdf

1、胎膜早破(premature rupture of memberane,PROM)是指胎膜破裂發(fā)生在臨產(chǎn)前。如發(fā)生在妊娠滿37周后,稱足月胎膜早破(term premature rupture ofmemberane,tPROM),而發(fā)生在妊娠不滿37周者,稱足月前胎膜早破(pretermpremature rupture of memberane,pPROM)。PROM可引起早產(chǎn)、母嬰感染、臍帶脫垂等諸多并發(fā)癥,增加了圍生期母兒發(fā)病率

2、和死亡率,是威脅母兒健康的常見產(chǎn)科并發(fā)癥之一。但確切病因及發(fā)病機制尚不明確,這為臨床上有效預(yù)防PROM的發(fā)生帶來了極大困難。
　　近年來對細胞因子、細胞凋亡、酶類與PROM關(guān)系的研究較多且已達到了分子生物學(xué)水平,但對胎膜本身發(fā)育方面的研究相對較少。間隙連接是普遍存在于動物組織細胞間的一種通訊方式,主要是由間隙連接蛋白(connexin,Cx)構(gòu)成,對細胞的增殖分化、凋亡、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)及機體的新陳代謝、生長發(fā)育等生理功能起重要調(diào)控

3、作用。Cx與細胞生長發(fā)育及增殖分化等密切相關(guān),是維持機體組織器官正常結(jié)構(gòu)及功能的基礎(chǔ)。Cx的正常表達和異常表達,可直接影響細胞及組織、器官的功能狀態(tài)。Cx分為很多亞型,其中分布最廣泛的是Cx43。細胞凋亡與組織器官的發(fā)育和機體正常生理活動的維持有關(guān),研究表明細胞凋亡與PROM的發(fā)生密切相關(guān),B細胞淋巴瘤/白血病(B-cell lymphoma/leukemia,Bcl)家族中的Bcl-2蛋白可以抑制細胞凋亡,而Bax蛋白可以促進細胞凋亡

4、,但兩者是否參與胎膜組織細胞凋亡的調(diào)控,文獻報道并不一致。
　　目的：本研究采用免疫組化(PV-9000)法檢測Cx43與Bax、Bcl-2在PROM患者胎膜組織中的表達,分析Cx43與Bax、Bcl-2表達的相關(guān)性,探討三者在PROM發(fā)病機制中的作用及其相互關(guān)系;分析研究Cx43在胎膜組織中的正?；虍惓１磉_與胎膜組織本身生長發(fā)育的關(guān)系,同時進一步證實Bax、Bcl-2是否參與胎膜組織中細胞凋亡的調(diào)控及其所介導(dǎo)的細胞凋亡在PROM

5、發(fā)病機制中的作用;對pPROM和tPROM進行對比分析研究,探討兩者發(fā)病機制的異同。為PROM的預(yù)防提供理論依據(jù)。
　　材料與方法：選擇2007年10月~2008年04月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的妊娠32周~42周孕婦60例。30例發(fā)生胎膜早破(PROM組),其中足月前胎膜早破15例(pPROM組),足月胎膜早破15例(tPROM組);30例未發(fā)生胎膜早破(正常對照組)。三組病例均于臨產(chǎn)前行剖宮產(chǎn)術(shù),胎盤胎膜娩出后10m

6、in內(nèi)取人工胎膜破口靠近宮頸處且距破口邊緣約>1cm處2cm×2cm大小胎膜全層一塊,PROM組剪取胎膜時避開胎膜自然破裂口。標(biāo)本采集后即用生理鹽水沖凈血跡及羊水,置入10％甲醛溶液中固定,石蠟包埋,3μm連續(xù)切片5張備用。PROM的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考豐有吉、沈鏗主編的8年制人民衛(wèi)生出版社第1版《婦產(chǎn)科學(xué)》。常規(guī)HE染色后在光鏡下進行形態(tài)學(xué)觀察。采用免疫組化(PV-9000)法檢測Cx43與Bax、Bcl-2在胎膜組織中的表達。PV陽性標(biāo)準(zhǔn):

7、光學(xué)顯微鏡下胎膜組織細胞膜和/或細胞漿及細胞核呈黃色或棕黃色顆粒者為陽性表達。采用Biosens Digital Imaging System圖像分析儀、leica Qwin軟件進行圖像采集分析,以陽性區(qū)平均灰度值為檢測指標(biāo),每張免疫組化切片隨機選取5個高倍視野(10×40),計算其陽性區(qū)平均灰度值。整個圖像采集過程由同一人操作。本實驗所有數(shù)據(jù)均采用SPSS10.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理,所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示,多組間比

8、較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD檢驗,指標(biāo)間相關(guān)性采用直線相關(guān)分析,以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：1、HE染色結(jié)果:HE染色后對胎膜組織進行形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),PROM組中胎膜組織的結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯改變,組織完整性差,多見羊膜層和絨毛膜層分離,羊膜層連續(xù)性差、上皮細胞排列紊亂,羊膜層部分缺失,膠原纖維及細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)呈無序狀態(tài)并減少;而正常對照組胎膜組織結(jié)構(gòu)相對完整,羊

9、膜及絨毛膜層輕輕貼附,層次清楚,厚度均勻,羊膜層上皮細胞連續(xù)性好,膠原纖維及ECM排列整齊,無明顯缺失。2、免疫組化(PV-9000法)結(jié)果:三組胎膜組織中均可見Cx43與Bax、Bcl-2呈不同程度的陽性表達。Cx43主要定位于絨毛膜滋養(yǎng)細胞的細胞膜、細胞漿及部分細胞核中,羊膜上皮細胞有少許表達;Bax主要定位于絨毛膜滋養(yǎng)細胞和羊膜上皮細胞的細胞漿中;Bcl-2主要定位于絨毛膜滋養(yǎng)細胞的細胞膜和細胞漿中。Cx43在羊膜上皮的少許表達不

10、做統(tǒng)計學(xué)處理。3、Cx43與Bax、Bcl-2在三組胎膜組織中的陽性表達:①tPROM組中Cx43的陽性表達明顯低于正常對照組(P<0.01);Bcl-2的陽性表達明顯低于正常對照組(P<0.01);而Bax的陽性表達高于正常對照組(P<0.05),兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。②pPROM組Cx43的陽性表達明顯低于tPROM組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);而Bcl-2、Bax在pPROM和tPROM兩組的比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0

11、.05)。4、PROM組中Cx43與Bax、Bcl-2表達水平的相關(guān)性:PROM組中Cx43的表達水平與Bax的表達呈負相關(guān)性(r=-0.309,P=0.016);而Cx43的表達水平與Bcl-2的表達無相關(guān)性(r=-0.199,P=0.145)。
　　結(jié)論：1、PROM患者胎膜組織中Cx43低表達介導(dǎo)的胎膜組織發(fā)育異常,Bax高表達和Bcl-2低表達介導(dǎo)的細胞凋亡可能與PROM的發(fā)生有關(guān);2、PROM患者胎膜組織中Cx43和Ba