硫化氫對大鼠肝纖維化的影響及其與PI3K-Akt信號(hào)通路的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　觀察硫化氫供體硫氫化鈉及PI3K/Akt信號(hào)通路特異性抑制劑LY294002對肝纖維化大鼠肝組織形態(tài)學(xué)及膠原沉積的影響,探討硫化氫與PI3K/Akt信號(hào)通路的關(guān)系,進(jìn)一步了解硫化氫對肝纖維化作用的分子機(jī)制。
　　方法:
　　采用四氯化碳棉籽油背部皮下注射聯(lián)合高脂肪高膽固醇飼料及酒精的復(fù)合因素法建立肝纖維化大鼠模型。肝纖維化模型大鼠于建模第六周開始分為5組:肝纖維化組(HF組)、DMSO溶劑對照組(D組)、硫

2、氫化鈉組(S組)、LY294002組(L組)、LY294002+硫氫化鈉組(LS組),分別腹腔注射生理鹽水、2‰DMSO溶液、LY294002溶液(0.3mg/kg·d)、硫氫化鈉溶液(56μmol/kg·d)、LY294002溶液+硫氫化鈉溶液(0.3mg/kg·d、56μmol/kg·d)進(jìn)行干預(yù),共12次。各組大鼠均于干預(yù)結(jié)束后次日處死并留取肝臟。經(jīng)HE染色觀察肝組織纖維化分期,Masson染色計(jì)算用于評估肝組織內(nèi)膠原沉積的SSS

3、評分,免疫組織化學(xué)染色觀察肝組織I、III型膠原蛋白的表達(dá),RT-PCR法檢測肝組織內(nèi)I、III型膠原mRNA表達(dá)水平,Western blot法檢測肝組織內(nèi)PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)HE染色見肝纖維模型組肝臟內(nèi)小葉結(jié)構(gòu)紊亂,纖維結(jié)締組織增生、假小葉形成,肝細(xì)胞變性壞死及炎細(xì)胞浸潤明顯。
　　(2)HE染色觀察肝纖維化分期,HF組、D組肝纖維分期較N組顯著升高,S組、LY組肝纖維化分期分

4、別較HF組、D組下降,LY組、S組及LS三組間無明顯差異。
　　(3)Masson評價(jià)肝組織SSS評分,HF組、D組SSS評分較N組顯著升高,S組、LY組SSS評分分別較HF組、D組降低,LS組SSS評分比S組低,但比LY組高。
　　(4)免疫組織化學(xué)染色及RT-PCR法檢測肝組織I、III型膠原蛋白及其mRNA的表達(dá),HF組、D組I、III型膠原蛋白及其mRNA表達(dá)較N組顯著增加,S組、LY組I、III型膠原蛋白及其mRN

5、A分別較HF組、D組減少,LS組I、III型膠原蛋白及其mRNA表達(dá)比S組少,但比LY組多。
　　(5)Western blot結(jié)果示:HF組、D組PI3K、p-Akt表達(dá)較N組顯著增多,LY組PI3K、p-Akt表達(dá)較D組顯著減少,S組PI3K、p-Akt表達(dá)與HF組無明顯差異,LS組PI3K、p-Akt表達(dá)較S組少,但比LY組多。
　　結(jié)論:
　　(1)采用四氯化碳復(fù)合因素法可成功建立肝纖維化動(dòng)物模型;