ADMA對(duì)肝星狀細(xì)胞活化及信號(hào)通路的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察非對(duì)稱性二甲基精氨酸對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖活化的影響及可能涉及的信號(hào)傳導(dǎo)通路。
　　 方法：體外培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分組培養(yǎng)。予不同濃度的ADMA及P38MAPK阻斷劑(SB203580)處理HSC，應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；通過(guò)MTT法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響；應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)藥物作用后P38MAPK、TGF-β1、Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)水平的變化；通過(guò)ELISA法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組Ⅰ型

2、膠原蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：1、通過(guò)鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化顯示：隨著ADMA濃度的增加，細(xì)胞體積逐漸增大，較對(duì)照組伸展更明顯，生長(zhǎng)狀態(tài)良好。2、MTT實(shí)驗(yàn)表明：ADMA呈濃度-時(shí)間依賴性促進(jìn)HSC增殖，在ADMA(10μmol/l)、作用48h時(shí)細(xì)胞增殖率最高；SB203580可抑制HSC增殖，隨著SB203580濃度增加，HSC增殖抑制率逐漸增加。3、RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：ADMA呈濃度依賴性上調(diào)P38MAPK、TGF

3、-β1、Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)；而SB203580則使P38MAPK、TGF-β1、Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)水平下降。4、ELISA實(shí)驗(yàn)表明隨著ADMA濃度增加，Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)逐漸增多；SB203580則呈濃度依賴性降低Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)論：ADMA促進(jìn)HSC增殖活化進(jìn)一步促進(jìn)ECM的增多，可能與激活P38MAPK信號(hào)通路，上調(diào)TGF-β1表達(dá)，增加膠原合成有關(guān)；SB203580能抑制HSC增殖、P38MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路