亞臨床甲狀腺功能減退癥動(dòng)物模型的建立.pdf

1、目的： 亞臨床甲狀腺功能減退癥簡(jiǎn)稱亞臨床甲減，又稱輕度甲狀腺功能衰竭(mild thyroid failure，MTF)，是以促甲狀腺激素(TSH)水平升高和血清甲狀腺素(T4)水平正常為特征的甲狀腺疾病。亞臨床甲減可伴不典型或不伴甲狀腺功能減退的癥狀和體征。亞臨床甲減的患病率各國報(bào)道不一，在1％-10％之間。亞臨床甲減的病因與甲減相同，常見的原因?yàn)樽陨砻庖?。一些藥物如鋰、?干擾素、胺碘酮等都能造成TSH值升高。亞臨床甲減的主

2、要不良后果是發(fā)展為臨床甲減和促進(jìn)缺血性心臟病的發(fā)生。妊娠婦女的甲減是輕微的或者是無癥狀的，胎兒的神經(jīng)發(fā)育也可以受到損傷；如果對(duì)妊娠期的甲減給于左甲狀腺素(L-T4)治療，后代智力將不會(huì)受到影響。亞臨床甲減對(duì)身體多方面的危害已經(jīng)得到證實(shí)，但是亞臨床甲減的致病機(jī)制尚不清楚。因此，建立亞臨床甲減的動(dòng)物模型以明確亞臨床甲減的致病機(jī)制顯得非常必要。本研究通過手術(shù)切除動(dòng)物的甲狀腺組織并用L-T4替代治療的方法，探索亞臨床甲狀腺功能減退癥大鼠動(dòng)物模型

3、的造模方法。 方法： 將150-180克的48只wistar雌性大鼠，普通飼料加蒸餾水飼養(yǎng)一周后隨機(jī)分為4組。 對(duì)正常對(duì)照(NC)組(24只)實(shí)施假甲狀腺切除術(shù)：10％水合氯醛溶液麻醉，備皮，切開頸部皮膚，鈍性分離結(jié)締組織，僅暴露甲狀腺而不損傷甲狀腺，隨即縫合。術(shù)后飼以普通飼料和蒸餾水。每?jī)商煊涗浺淮误w重。 L-T4處理組和甲減(HT)組(8只)實(shí)施甲狀腺全切術(shù)：10％水合氯醛溶液麻醉，備皮，切開頸部皮膚

4、，鈍性分離結(jié)締組織和胸骨舌骨肌，切斷雙側(cè)甲狀腺肌，摘除兩側(cè)和峽部甲狀腺，縫合。術(shù)后飼以普通飼料和高鈣水(0.1％碳酸氫鈣)。 每?jī)商煊涗浺淮误w重。 5周后大鼠體重相對(duì)穩(wěn)定，用大鼠固定器固定甲狀腺全切后的大鼠，剪尾取血，3000轉(zhuǎn)離心20分鐘，分離血清，存入Eppendrof管中，-4℃冰箱中保存，血清TSH、T4由固相化學(xué)發(fā)光酶免疫分析(ICMA)法檢測(cè)(DPC，USA)。 給與NC組和HT組每天腹部皮下注射安慰

5、劑(PBS溶液)。 L-T4處理Ⅰ組(8只)每天腹部皮下注射劑量為0.95μg/100g體重的L-T4，L-T4處理Ⅱ組(8只)每天腹部皮下注射劑量為1.00μg/100g體重的L-T4。每天注射一次，連續(xù)注射16天，第17天處死大鼠。體重波動(dòng)在15克之內(nèi)，以最初配液時(shí)所采用的體重；超過15克，重新計(jì)算平均體重，重新配液。 第17天，水合氯醛麻醉后，上腹正中切口，游離肋骨，心臟采血，3000轉(zhuǎn)離心20分鐘，分離血清，存入

6、Eppendrof管中，-4℃冰箱中保存，待測(cè)血清TSH、TT4。 心臟取血后，穿刺針從左心室進(jìn)入主動(dòng)脈，剪開右心耳，迅速灌注600ml左右生理鹽水。心臟灌注后，迅速取部分肝、腎組織，稱重，液氮罐內(nèi)冷凍后放入-70℃冷凍箱內(nèi)保存，測(cè)定前肝、腎按照1:3的比例加入勻漿緩沖液在冰塊環(huán)境中制備勻漿，離心后取上清待測(cè)肝腎T4、T3。 當(dāng)實(shí)驗(yàn)組血清TSH高于對(duì)照組，而實(shí)驗(yàn)組TT4和對(duì)照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示亞臨床甲減鼠建模成功。取

7、正常組數(shù)據(jù)的90％可信區(qū)間為正常值范圍，計(jì)算成功率。 結(jié)果： HT組血清TSH水平(3.81±1.14 mIU/L)顯著高于NC組和L-T4處理組(P<0.01)，血清TT4水平檢測(cè)不到。 L-T4處理Ⅰ組血清TSH水平顯著高于NC組(0.394±0.029 mIU/L VS 0.071±0.022 mIU/L，P<0.01)，血清TT4水平和NC組沒有差異(4.01±0.92μg/dL VS4.06±0.96μ

8、g/dL，P=0.650)。 L-T4處理Ⅱ組血清TSH水平顯著高于NC組(0.325±0.033 mIU/L VS 0.071±0.022 mIU/L，P<0.01)，血清TT4水平和NC組沒有差異(4.13±1.27μg/dLVS4.06±0.96μg/dL，P=0.650)。 NC組血清TSH水平的90％可信區(qū)間為0.016 mIU/L～0.239 mIU/L，血清TT4水平的90％可信區(qū)間為2.33μg/dL～5

9、.98μg/dL。L-T4處理Ⅰ組符合亞臨床甲減診斷標(biāo)準(zhǔn)的有6例，成功率為75％；L-T4處理Ⅱ組符合亞臨床甲減診斷標(biāo)準(zhǔn)的有4例，成功率為50％。 L-T4處理Ⅰ組腎臟TT4水平和NC組比較沒有差異(18.48±2.35 ng/g VS20.26±3.08 ng/g，P=0.215)，腎臟TT3水平顯著低于NC組(1.63±0.74 ng/g VS2.90±1.09 ng/g，P<0.05)；L-T4處理I組肝臟TT4水平和NC

10、組沒有差異(35.14±5.58 ng/g VS 37.97±4.71 ng/g，P=0.290)，肝臟TT3水平顯著低于NC組(1.79±0.84 ng/g VS 3.04±1.17 ng/g，P<0.05)。 L-T4處理Ⅱ組腎臟TT4水平和NC組比較沒有差異(18.94±2.47 ng/g VS20.26±3.08 ng/g，P=0.359)，腎臟TT3水平顯著低于NC組(1.58±0.77 ng/g VS2.90±1.0