LDR、IM7誘導(dǎo)CML白血病干-祖細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:體外檢測(cè)LDR、IM7對(duì)CML白血病干/祖細(xì)胞凋亡的影響,并探討其相關(guān)作用機(jī)制。
　　 方法:取20例健康產(chǎn)婦臍血100ml,免疫磁株法分離純化CD34+、CD38-的正常造血干細(xì)胞(HSCs);取20例初診慢性髓細(xì)胞白血病(CML)慢性期患者骨髓液5～10ml,免疫磁株法分離純化富集CD34+、CD38-、CD123+的自血病干/祖細(xì)胞。處理一:將上述分離出的兩組細(xì)胞給予不同的劑量(0、12.5和50cGy)照射,輻照后

2、于24、48和72h收集細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同劑量對(duì)兩種干/祖細(xì)胞的細(xì)胞周期分椎及凋亡率的影響;RT-PCR和熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)兩種干/祖細(xì)胞中P16基因的變化。處理二:將分離出的白血病干/祖細(xì)胞與IM7(20μg/ml)孵育后,應(yīng)用Annexin-V試劑盒檢測(cè)IM7誘導(dǎo)LSCs凋亡狀況;熒光實(shí)時(shí)定量PCR及RT-PCR檢測(cè)LSCs中原癌基因C-myc、NF-kB表達(dá)狀況;Western-blot檢測(cè)LSC中Bcl-2蛋白表達(dá)變化

3、。
　　 結(jié)果:
　　 (1)CML-LSCs經(jīng)12.5cGy劑量照射后P16 mRNA表達(dá)略上調(diào),50cGy劑量照射后P16 mRNA水平明顯增高(P=0.002),而HSCs經(jīng)各劑量點(diǎn)LDR處理后P16基因轉(zhuǎn)錄水平無明顯的變化。
　　 (2)LSCs經(jīng)12.5cGy劑量處理后48h及50cGy劑量點(diǎn)照射后72h均出現(xiàn)了G0/G1期阻滯現(xiàn)象。
　　 (3)LSCs經(jīng)LDR處理后,細(xì)胞的早期凋亡率隨時(shí)間推

4、移逐漸增加,50cGy照射后72h處凋亡率(％)為17.75±11.76,與未照射組(8.13±4.71)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (4)經(jīng)IM7孵育后LSCs的早期凋亡率(％)由對(duì)照組5.42±1.84升高至12.58±2.84。
　　 (5)熒光實(shí)時(shí)定量PCR及RT-PCR檢測(cè)結(jié)果均提示IM7孵育后LSCs中原癌基因C-myc、NF-kB mRNA水平表達(dá)明顯降低,同時(shí)NF-KB激活-核轉(zhuǎn)運(yùn)檢測(cè)結(jié)果表明IM7孵

5、育后LSCs中NF-kB的活性受到抑制。
　　 (6)IM7(20μg/ml)能顯著抑制CML-LSCs中Bcl-2蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1.LDR及IM7在體外均能誘導(dǎo)CML白血病干/祖細(xì)胞的凋亡。
　　 2.LDR可能通過P16基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)上調(diào),使得CML-LSCs阻滯在G0/G1期,促進(jìn)LSCs的凋亡。
　　 3.抗CD44單克隆抗體IM7與白血病干/祖細(xì)胞上的受體CD44分