樹突狀細胞誘導(dǎo)白血病細胞分化及其作用機制的初步研究.pdf

1、目的：建立體外擴增C57BL/6小鼠樹突狀細胞(DC)的方法:應(yīng)用反復(fù)凍融法制備FBL-3小鼠紅白血病細胞腫瘤抗原并致敏DC，觀察致敏DC培養(yǎng)上清對FBL-3小鼠紅白血病細胞的誘導(dǎo)分化作用，初步探討DC誘導(dǎo)白血病細胞分化作用的機制，為白血病的誘導(dǎo)分化治療提供一條新的途徑。 方法： ①應(yīng)用1ng/ml白介素-4(IL-4)和10ng/ml粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)C57BL/6小鼠骨髓細胞，光

2、鏡和電鏡觀察DC發(fā)育過程中形態(tài)學(xué)變化；流式細胞術(shù)檢測DC表面分子CD80、 CD86、H-2Kb及I-Ab的表達情況。 ②常規(guī)培養(yǎng)并收集C57BL/6小鼠紅白血病細胞，反復(fù)動融法制備FBL-3腫瘤抗原，收集備用。 ③制備的FBL-3腫瘤抗原與培養(yǎng)的C57BL/6小鼠DC共孵育，致敏DC。 ④用ELISA法分別檢測未致敏DC和致敏DC第8天培養(yǎng)上清中IL-12的濃度。 ⑤分四組：標(biāo)準(zhǔn)IL-12組(陽性對照組

3、)；用致敏DC第8天的培養(yǎng)上清與FBL-3細胞共培養(yǎng)72小時組(致敏組)；用未致敏DC第8天的培養(yǎng)上清與FBL-3細胞培養(yǎng)72小時(未致敏組)；RPMI-1640組(陰性對照組)。分化后細胞分別用瑞氏染色記數(shù)單核細胞數(shù)、透射電鏡觀察細胞的超微結(jié)構(gòu)、流式細胞術(shù)檢測細胞表面CD14分子的陽性表達率，觀察三組的有何不同，并分析FBL-3細胞分化情況與IL-12濃度的關(guān)系。 結(jié)果： ①用IL-4和GM-CSF聯(lián)合培養(yǎng)小鼠骨髓細胞

4、3天后，可見細胞形態(tài)發(fā)生改變，細胞形態(tài)不規(guī)則；培養(yǎng)第6～8天，細胞表面出現(xiàn)較多毛刺樣突起，拉長，為典型的DC特征；流式細胞儀檢測DC表面分子有CD80、CD86、H-2Kb及I-Ab表達。 ②致敏DC培養(yǎng)第8天DC上清中IL-12的濃度為：630.82±43.96pg/ml，未致敏DC培養(yǎng)第8天DC上清中IL-12的濃度197.37±15.6pg/ml，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 ③經(jīng)致敏DC培養(yǎng)第8天上清作用后的FBL

5、-3細胞36.99±3.61％轉(zhuǎn)化為單核細胞，經(jīng)未致敏DC第8天DC培養(yǎng)上清作用72小時后的FBL-3細胞19.4±4.07％轉(zhuǎn)化為單核細胞，致敏與未致敏兩組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義；透射電鏡見：經(jīng)致敏DC培養(yǎng)第8天上清作用后的FBL-3細胞部分具有了典型單核細胞的特性，如馬蹄狀核、細胞核核膜完整、線粒體、核糖體等細胞器清楚，而未致敏組上述特點少見；流式細胞儀分析顯示：致敏DC培養(yǎng)第8天上清作用72小時后的FBL-3細胞分化后細胞表面CD14

6、分子表達陽性率為35.35±3.32％，經(jīng)未致敏DC第8天DC培養(yǎng)上清作用72小時后的FBL-3細胞分化后細胞表面CD14分子表達陽性率為16.08±3.07％，兩者比較有統(tǒng)計學(xué)意義。 ④對各組細胞的誘導(dǎo)分化率和培養(yǎng)上清中IL-12的濃度作相關(guān)性比較，結(jié)果顯示兩者高度相關(guān)。 結(jié)論： ①應(yīng)用IL-4聯(lián)合GM-CSF培養(yǎng)小鼠骨髓細胞，可大量擴增成熟DC，培養(yǎng)的DC符合其自身的特性。 ②FBL-3細胞經(jīng)致敏DC