補(bǔ)救性ICSI臨床結(jié)局及受精失敗卵子紡錘體和染色體分析.pdf

1、傳統(tǒng)體外受精（IVF）受精率維持在60-70％，然而，在精液常規(guī)正常的情況下，受精失敗的發(fā)生率為5％-15％，受精低下（定義為25％）的發(fā)生率為20％，這類夫婦，再次發(fā)生IVF受精失敗或者受精低下的發(fā)生率為30-50％。卵胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI）能成功避免大部分IVF周期中的受精失敗的發(fā)生，因此當(dāng)傳統(tǒng)IVF失敗時(shí)，可以考慮對(duì)這些IVF失敗的卵母細(xì)胞再次顯微注射。但是對(duì)受精失敗的1天齡的卵母細(xì)胞行補(bǔ)救性ICSI后，結(jié)局并不好。我們進(jìn)行

2、了臨床數(shù)據(jù)的回顧性分析來證明非男性因素不孕行傳統(tǒng)體外受精失敗后，對(duì)受精失敗卵母細(xì)胞行補(bǔ)救性ICSI價(jià)值不大，這可能由于卵母細(xì)胞缺陷導(dǎo)致受精失敗。已經(jīng)有人提出卵母細(xì)胞缺陷導(dǎo)致傳統(tǒng)體外受精失敗，但是卵母細(xì)胞異常相關(guān)的檢測(cè)卻很難做到，尤其是無法建立相關(guān)的動(dòng)物模型來解釋這種異常。紡錘體和染色體是反映卵母細(xì)胞質(zhì)量的微觀結(jié)構(gòu)，卵母細(xì)胞質(zhì)量對(duì)卵胞漿內(nèi)單精子注射的影響，是遲救性ICSI或者早救性ICSI后仍然未受精，或者受精后優(yōu)胚率，妊娠率低的重要原因

3、。所以，我們用激光共聚焦顯微鏡(LSCM)觀察卵母細(xì)胞內(nèi)部紡錘體，染色體結(jié)構(gòu)，而且我們第一次設(shè)立了對(duì)照組來進(jìn)一步證實(shí)卵母細(xì)胞缺陷影響非男性因素不孕患者的IVF結(jié)局。
　　 第一章
　　 目的: 探討卵細(xì)胞內(nèi)單精子注射（ICSI）對(duì)非男性因素不孕行體外受精（IVF）失敗患者治療結(jié)局的影響。
　　 方法: 回顧性分析2006年1月—2008年l2月由于第一周期常規(guī)體外受精(IVF)治療中卵子完全不受精或受精率≤25％

4、，行補(bǔ)救性ICSI的10個(gè)周期（補(bǔ)救性ICSI），以及因前次受精失敗而在隨后的治療周期中采取ICSI方法受精的19個(gè)周期（后續(xù)性ICSI）的ICSI治療結(jié)局。對(duì)照組為2007年因男方少弱精子進(jìn)行第1次ICSI治療的133個(gè)周期。
　　 結(jié)果: 補(bǔ)救性ICSI組受精率，優(yōu)胚率，植入率，妊娠率，分娩率均低于對(duì)照組，而且受精率與分娩率差異有顯著性（P<0.05），優(yōu)胚率，植入率，妊娠率差異有極顯著性（P<0.01）；后續(xù)性ICSI組植

5、入率，妊娠率，分娩率分別為8.8％，21.1％，15.8％，均低于對(duì)照組的21.2％，45.1％，39.1％，且有顯著性差異（P<0.05），受精率兩者分別為49.5％，63.5％，有極顯著性差異（P<0.01）。優(yōu)胚率后續(xù)性ICSI組低于對(duì)照組，但是差異無顯著性。
　　 結(jié)論: (1)對(duì)于非男性因素不孕IVF失敗患者，ICSI能避免受精失敗，但是受精率以及妊娠結(jié)局受到卵母細(xì)胞的隱匿性異常的影響。(2)考慮ICSI的安全性，

6、補(bǔ)救性ICSI適合作為IVF后受精失敗的診斷手段而不是治療目的。(3)補(bǔ)救性ICSI組（16-18小時(shí)）由于無妊娠結(jié)局，建議不推廣此方法。
　　 第二章
　　 目的：研究非男性因素不孕行IVF后受精失敗的第2天卵母細(xì)胞微管、紡錘體的形態(tài)，染色體的排列，卵子激活障礙的情況。探討紡錘體形態(tài)異常，染色體沒有準(zhǔn)確的結(jié)合到紡錘體上，微管排列異常不能形成紡錘體，是否參與了IVF受精失敗的原因。
　　 方法：來自生殖中心非男

7、性因素不孕行IVF后受精率低于25％，Day2仍未見分裂的MII卵母細(xì)胞（胞漿內(nèi)未見原核，卵周隙內(nèi)僅見第一極體，48h沒有卵裂時(shí)確定為未受精卵母細(xì)胞）作為實(shí)驗(yàn)組（IVF FF組），因男性因素行ICSI治療后Day2仍未形成原核的MII期卵母細(xì)胞作為對(duì)照組（ICSI NF組），同時(shí)，因男性因素行ICSI過程中未熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)后成熟卵母細(xì)胞作為對(duì)照組（IVM組）。采用免疫熒光法分別對(duì)IVF受精失敗的MII期卵（IVF FF組），I

8、CSI未受精卵（ICSI NF組）及體外成熟的MII期卵（IVM組）進(jìn)行染色。采用 anti-α-tubulin-FITC對(duì)微管紡錘體進(jìn)行免疫熒光染色，PI對(duì)染色體進(jìn)行染色。用Confocal進(jìn)行免疫熒光觀察并分別統(tǒng)計(jì)其紡錘體，染色體異常率；以及統(tǒng)計(jì)IVF FF組和ICSI NF組卵子激活率的差異。
　　 結(jié)果：一共有164個(gè)未受精卵子（其中IVF FF 93個(gè)，ICSI NF 71個(gè)）和56個(gè)IVM卵子參與實(shí)驗(yàn)，IVF FF組

9、卵子紡錘體異常率和染色體異常率均顯著高于ICSI NF組和IVM組(異常紡錘體率分別為 80.6％、64.8％、57.1％；異常染色體率分別為91.4％、80.3％、75％)，差異有顯著性。而ICSI NF組與IVM組相比紡錘體和染色體異常率均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。IVF FF組和ICSI NF組卵子激活障礙的比率兩組分別為16.1％、49.3％，差異有極顯著性。
　　 結(jié)論： (1)IVF受精率低或者受精失敗，卵母細(xì)胞的隱匿性異常

10、發(fā)揮重要作用(2)紡錘體和染色體是反映卵母細(xì)胞質(zhì)量的微觀結(jié)構(gòu)，卵母細(xì)胞質(zhì)量對(duì)卵胞漿內(nèi)單精子注射的影響，是遲救性ICSI或者早救性ICSI后仍然未受精，或者受精后優(yōu)胚率，妊娠率低的重要原因。(3)IVF受精失敗組MII期卵母細(xì)胞紡錘體和染色體異常率明顯高于男性因素行ICSI未受精組（P<0.05），卵母細(xì)胞的質(zhì)量是其重要影響因素，也說明了臨床上前次IVF受精失敗組此次行后續(xù)性ICSI治療植入率和妊娠率仍然顯著低于因男性因素行ICSI組