盤羊和巴什拜羊MHC-DRB1、DRB3基因多態(tài)性與綿羊肺炎支原體感染相關(guān)性研究.pdf

1、主要組織相容性復(fù)合體(Major Histocompatibility Complex，MHC)是脊椎動物染色體中緊密連鎖、高度多態(tài)的區(qū)域，OLA是綿羊淋巴細(xì)胞表面抗原（Ovine Lymphocyte Antigen）即綿羊 MHC的簡稱。MHC基因的高度多態(tài)性對病原的免疫識別起重要作用，特別是 MHC-Ⅱ類分子的 DRB基因編碼的抗原具有重要的免疫調(diào)控作用，與許多動物疾病的易感性、抗性及免疫應(yīng)答密切相關(guān)。綿羊肺炎支原體(Mycopl

2、asma ovipneumoniae，M.O)是傳染性胸膜肺炎的病原之一，主要引起綿羊、山羊及野生綿羊發(fā)病，且不同綿羊品種對 M.O的易感性存在明顯差異。本研究在野生盤羊與新疆地方品種巴什拜羊雜交一代羔羊暴發(fā)綿羊支原體肺炎確診基礎(chǔ)上，利用綿羊肺炎支原體抗體 Elisa試劑盒檢測盤羊和巴什拜羊，采用 PCR-RFLP方法檢測分析 M.O陽性及陰性巴什拜羊和盤羊OLA-DRB1、DRB3外顯子2多態(tài)性及差異，探索兩種不同品種綿羊 OLA與

3、M.O感染的相關(guān)性，為進(jìn)一步開展綿羊雜交、抗病育種提供理論依據(jù)。試驗主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　1、為查明某動物園盤羊呼吸性疾病的原因，從發(fā)病盤羊群采集的病料中分離出5株支原體。通過菌落形態(tài)觀察、生化反應(yīng)、PCR鑒定和動物回歸試驗及序列測定，確診引起盤羊發(fā)病的病原是綿羊肺炎支原體(M.O)。此結(jié)果為國內(nèi)外首次報道，為 M.O感染的流行病學(xué)特征增加了新內(nèi)容。
　　通過對 PCR擴(kuò)增條件優(yōu)化以及擴(kuò)增的特異性、敏感性分析，建立了快速

4、簡便、經(jīng)濟(jì)實用的檢測盤羊肺炎支原體感染的 PCR方法。
　　2、采用 PCR-RFLP方法，檢測盤羊與巴什拜羊 OLA-DRB3基因外顯子2的遺傳多態(tài)性；分別對 M.O陰性和陽性盤羊與巴什拜羊 OLA-DRB3外顯子2基因型頻率及等位基因頻率進(jìn)行統(tǒng)計分析和差異性檢驗。
　　結(jié)果顯示，盤羊與巴什拜羊 OLA-DRB3基因外顯子2在 Taq I、Pst I和 HaeⅢ酶切位點存在豐富的多態(tài)性，盤羊群體檢測出9種基因型，8種等位基

5、因，巴什拜羊出現(xiàn)24種基因型和11種等位基因；在第122、154、168和241堿基處，盤羊與巴什拜羊 OLA-DRB3基因外顯子2均表現(xiàn)出多態(tài)性。盤羊的 Pst I、HaeⅢ位點和巴什拜羊的 Taq I、Pst I位點達(dá)到 Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），其余位點未達(dá)到平衡狀態(tài)（P﹤0.01）；盤羊OLA-DRB3外顯子2的基因雜合度、多態(tài)信息含量和有效等位基因數(shù)分別為0.300、0.3339和1.5037，巴什拜羊

6、的對應(yīng)參數(shù)值為0.541、0.4854和3.2918，表明巴什拜羊遺傳變異程度較高，盤羊具有較為穩(wěn)定的基因遺傳結(jié)構(gòu)。
　　OLA-DRB3基因中，盤羊 HaeⅢ-AA（P﹤0.01）、巴什拜羊 HaeⅢ-BC（P﹤0.05）為 M.O抗性基因型，巴什拜羊 HaeⅢ-DD（P﹤0.05）為 M.O易感基因型,Pst I A（P﹤0.01）和 Pst I B（P﹤0.01）、HaeⅢ C（P﹤0.01）分別是巴什拜羊 M.O易感和抗性

7、相關(guān)等位基因。
　　3、以 PCR-RFLP方法，檢測盤羊與巴什拜羊 OLA-DRB1基因外顯子2的遺傳多態(tài)性；分別對 M.O陰性和陽性盤羊與巴什拜羊 OLA-DRB1外顯子2基因型頻率及等位基因頻率進(jìn)行統(tǒng)計分析和差異性檢驗。
　　在 SacI、BsaHI和 HaeIII酶切位點，盤羊與巴什拜羊的 OLA-DRB1基因外顯子2多態(tài)性豐富，盤羊檢測出8種基因型6種等位基因，巴什拜羊出現(xiàn)12種基因型9種等位基因。二者均在第296

8、、178、173、123、118和71bp等6個堿基位點存在多態(tài)性。盤羊 SacI位點呈 Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)（P＞0.05），巴什拜羊和盤羊的其它位點均未達(dá)到平衡狀態(tài)；盤羊的基因雜合度、多態(tài)信息含量和有效等位基因數(shù)為0.327、0.3604和1.5102，巴什拜羊的對應(yīng)數(shù)值分別為0.479、0.4794和2.8925，表明2個品種 OLA-DRB1基因的遺傳變異程度均呈中度多態(tài)。
　　對 M.O陰性和陽性羊基因型