腦缺血再灌注損傷后自噬激活及調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察大鼠全腦缺血再灌注損傷后海馬自噬的激活情況，探討腦缺血再灌注損傷后大腦海馬自噬激活的分子調(diào)控機(jī)制，為腦缺血的治療提供新的藥物作用靶點(diǎn)。 方法: 使用四動(dòng)脈結(jié)扎法制作大鼠全腦缺血再灌注損傷模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為:假手術(shù)組(sham組)、缺血再灌注組。在全腦缺血15分鐘后，分別再灌注0min,30min,3h，6h,12h，1d，3d，之后分離大腦海馬，提取蛋白，Westernblot檢測各個(gè)時(shí)間點(diǎn)大鼠全腦缺血/復(fù)灌后海馬

2、自噬活化標(biāo)志蛋白LC3的表達(dá)，同時(shí)檢測自噬調(diào)控蛋白Beclin 1的表達(dá)，以及c-Jun氨基端激酶JNK的活化情況。 結(jié)果: 與假手術(shù)組相比，大鼠全腦缺血再灌注損傷后海馬區(qū)LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ蛋白的表達(dá)開始上調(diào)，在全腦缺血再灌注損傷后1d表達(dá)最強(qiáng),同時(shí)自噬調(diào)控蛋白Beclin 1在腦缺血再灌注后開始逐漸升高，在再灌注損傷后一天達(dá)峰值。同樣我們還檢測了c-Jun氨基端激酶JNK缺血再灌注損傷后在大腦海馬的活化情況，缺血再灌注損傷

3、后30min磷酸化的JNK表達(dá)開始上調(diào)。 結(jié)論: 大鼠全腦缺血再灌注損傷后海馬LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ蛋白表達(dá)上調(diào)，表明腦缺血再灌注損傷后海馬區(qū)域的自噬活性上調(diào)。我們的研究還表明腦缺血再灌注損傷后海馬區(qū)JNK發(fā)生活化，之后在缺血再灌注損傷1d時(shí)自噬調(diào)控蛋白Beclin 1的表達(dá)達(dá)峰值。在腦缺血再灌注損傷后海馬觀察到的這一系列現(xiàn)象結(jié)合現(xiàn)有的自噬調(diào)控理論，我們推斷腦缺血再灌注損傷后海馬自噬激活的是由于再灌注損傷首先引起JNK的活化，之