辣椒疫霉效應(yīng)因子RxLR的蛋白晶體學(xué)研究.pdf

1、辣椒疫病是一種傳播范圍廣，危害性大的世界性土傳病害，其病原Phytophthoracapsici自從1922年被Leon Leonian首次確定之后，在世界各地均有發(fā)現(xiàn)。辣椒疫霉在生物分類學(xué)中屬于卵菌門，卵菌綱，霜霉目，霜霉科，疫霉屬，它主要侵染葫蘆科、豆科、茄科、十字花科等四科約10個屬的作物。辣椒疫霉對世界農(nóng)業(yè)特別是辣椒生產(chǎn)造成了巨大的損失。辣椒疫病常規(guī)防治方法以施用農(nóng)藥為主，極大程度的破壞了生態(tài)環(huán)境。因此通過探索辣椒疫霉侵染機(jī)制研

2、發(fā)新的防治方法迫在眉睫。
　　RxLR效應(yīng)因子是指含有RxLR-DEER結(jié)構(gòu)域，在辣椒疫霉侵染寄主時能進(jìn)入寄主細(xì)胞，抑止寄主的防衛(wèi)反應(yīng)，從而有利于辣椒疫霉侵入與擴(kuò)展的一類蛋白。為了從蛋白三維結(jié)構(gòu)角度闡述RxLR效應(yīng)因子作用機(jī)制，本研究克隆出多個RxLR效應(yīng)因子基因，對其進(jìn)行了原核表達(dá)，得到高表達(dá)量的重組菌株，并對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化，然后用純化后的蛋白進(jìn)行蛋白結(jié)晶條件的篩選實(shí)驗(yàn)，目的是得到分辨率在3(A)以上的RxLR蛋白晶體用以進(jìn)行

3、RxLR效應(yīng)因子三維結(jié)構(gòu)的解析。主要結(jié)果如下:
　　1、本研究克隆了20多個RxLR效應(yīng)因子基因，這些基因翻譯的氨基酸序列都具有RxLR效應(yīng)因子的結(jié)構(gòu)域。
　　2、本研究嘗試多種方法對表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行純化條件的摸索，其中編碼為129044效應(yīng)因子蛋白較穩(wěn)定，獲得了濃度大于10mg/ml，純度在95％以上的129044蛋白。
　　3、本研究對純化好的129044蛋白進(jìn)行了晶體生長條件的篩選，得到了質(zhì)量較好的蛋白晶體，在