供體非諾多泮預(yù)處理增加HIF-1α及HO-1表達(dá)減輕移植腎損傷的研究.pdf

1、半個(gè)世紀(jì)以來(lái)我國(guó)的腎移植一直迅速發(fā)展。目前每年大約1萬(wàn)多人接受腎移植手術(shù)，但每年等待接受腎移植手術(shù)的患者達(dá)150萬(wàn)人。沒(méi)有腎臟就沒(méi)有腎移植，與患病群體比較，腎源一直處于“供不應(yīng)求”的狀態(tài)。隨著心臟死亡器官捐獻(xiàn)(donationaftercardiacdeath，DCD)標(biāo)準(zhǔn)的建立，DCD供體來(lái)源的腎臟將成為移植腎的一個(gè)重要來(lái)源，然而這種來(lái)源的器官質(zhì)量與活體捐獻(xiàn)相比將大打折扣。
　　非諾多泮是D1樣多巴胺受體（D1-likerece

2、ptor，DA1R）選擇性激動(dòng)劑，除了抗高血壓作用外，它還可增加腎臟血流及腎小球?yàn)V過(guò)率。低劑量非諾多泮在不影響全身血壓的情況下也能增加腎臟血流；更高的劑量降低血壓，但仍能保持腎臟灌注。供體給予非諾多泮可減少移植物丟失，實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)這些藥物可減輕細(xì)胞及移植腎的冷缺血損傷，且移植腎冷保存時(shí)間越長(zhǎng)，這種保護(hù)作用越明顯。非諾多泮還可減輕及預(yù)防實(shí)驗(yàn)動(dòng)物低血壓及造影劑引發(fā)的急性腎損傷。有研究證實(shí)多巴胺能藥物可以誘導(dǎo)增加腎小管細(xì)胞內(nèi)血紅素加氧酶（he

3、meoxygenase1,HO-1）發(fā)揮腎臟保護(hù)作用，從而減少移植腎損傷。HO-1是亞鐵血紅素降解為一氧化碳、鐵離子和膽綠素的限速酶，它是反映細(xì)胞應(yīng)激狀態(tài)的一個(gè)敏感指標(biāo)；HO-1增加表達(dá)可延長(zhǎng)移植物存活，減少間質(zhì)纖維化，還可抑制內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1）可增加HO-1的表達(dá)。HIF-1由HIF-1α和HIF-1β組成異源二聚體，活性取決于HIF-1α的穩(wěn)定性。HIF

4、-1識(shí)別并結(jié)合DNA的共有序列5’-RCGTG-3’，通過(guò)影響靶基因參與調(diào)節(jié)一系列的生理功能，如能量代謝、血管重塑、細(xì)胞增殖和新生血管形成。HIF-1α上調(diào)也可減輕腎缺血損傷。因此我們認(rèn)為非諾多泮可以增加HIF-1α及HO-1的表達(dá)發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。
　　目的：通過(guò)在供體大鼠體內(nèi)輸注非諾多泮及DA1R抑制劑，觀察非諾多泮預(yù)處理對(duì)腎移植術(shù)后受體及移植腎功能的影響。研究非諾多泮供體預(yù)處理是否通過(guò)增加移植腎內(nèi)HIF-1α及HO-1的表達(dá)

5、減輕移植腎冷缺血損傷。深入理解非諾多泮對(duì)移植腎臟發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制將有助于進(jìn)一步的臨床研究。
　　方法：在供體大鼠體內(nèi)輸注非諾多泮，觀察非諾多泮預(yù)處理對(duì)移植腎的影響。給予DA1R抑制劑后是否抑制非諾多泮的作用。研究非諾多泮是否通過(guò)活化HIF-1α及HO-1的表達(dá)發(fā)揮移植腎冷缺血保護(hù)作用。
　　48只SD大鼠隨機(jī)均分為非諾多泮供體預(yù)處理組（FD組）、DA1R抑制劑預(yù)處理組（Sch組）、FD+Sch組、和對(duì)照無(wú)處理（Contro

6、l）組，每組6對(duì)供受體。供體預(yù)處理程序簡(jiǎn)述如下：FD組供體大鼠經(jīng)尾靜脈輸注非諾多泮60min，劑量5μg/kg·min；Sch組輸注DA1R抑制劑Sch2339060min，劑量10μg/kg·min；Sch+FD組同時(shí)輸注Sch23390與FD60min；Control組無(wú)預(yù)處理程序，余步驟同其他組。18h后取左腎作為移植供腎保存于HC-A液中，4℃保存24h后原位植入同系SD大鼠。采用本室改良的腎血管端端吻合方法建立大鼠原位腎移植模

7、型，術(shù)后一周經(jīng)背側(cè)切口切除右腎，術(shù)后第10天經(jīng)心臟采血，離心取血清，并取移植腎備檢。檢測(cè)指標(biāo)有血肌酐及血尿素氮值、移植腎內(nèi)氧化應(yīng)激水平、IL-8及TNF-α值；HE染色觀察移植腎形態(tài)學(xué)改變；TUNEL染色檢測(cè)移植腎內(nèi)凋亡分布；檢測(cè)移植腎HIF-1α及HO-1表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.我們經(jīng)背部切口切除右側(cè)健腎的原位大鼠腎移植模型適合用作腎移植的研究。
　　2.非諾多泮供體預(yù)處理組受體大鼠血肌酐及血尿素氮值、血清炎

8、癥因子水平及氧化應(yīng)激水平檢測(cè)值均低于其余組，表明該組大鼠移植腎損傷輕，功能更好。非諾多泮供體預(yù)處理可減輕移植腎冷缺血損傷，發(fā)揮移植腎保護(hù)作用。
　　3.WesternBlot及反轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)果顯示非諾多泮供體預(yù)處理組移植腎內(nèi)HIF-1α及HO-1的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，DA1R抑制劑削弱了非諾多泮的移植腎保護(hù)功能，削弱了非諾多泮對(duì)HIF-1α及HO-1的影響；表明HIF-1α及HO-1參與了非諾多泮的移植腎保護(hù)功能。
　　結(jié)論