甘油誘導(dǎo)急性腎損傷大鼠腎組織HO-1和HIF-1α的表達(dá)變化及山莨菪堿的干預(yù)作用.pdf

1、目的：急性腎損傷（AKI）為臨床常見(jiàn)的急危重癥，若不能早期診斷、及時(shí)處理，常會(huì)造成不可逆的腎臟損害。近年來(lái)，AKI的發(fā)病率及死亡率并沒(méi)有隨著醫(yī)療水平的提高而下降。如何防治并早期干預(yù)AKI已成為基礎(chǔ)和臨床腎臟病學(xué)者研究的重要課題。本研究采用甘油誘導(dǎo)AKI大鼠模型，觀察其生化指標(biāo)的變化，檢測(cè)腎組織HO-1、HIF-1α的表達(dá)以及山莨菪堿的干預(yù)作用，為進(jìn)一步研究AKI的發(fā)病機(jī)制，并尋找有效的防治措施，提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。
　　 方法：

2、⑴健康雄性SD大鼠45只，體重200-220g，隨機(jī)分為三組：正常對(duì)照組（n=15）、AKI模型組（n=15）、山莨菪堿干預(yù)組（n=15）。所有大鼠均禁水24小時(shí)，模型組、治療組均給予50％甘油生理鹽水10ml/kg雙后肢肌肉注射，對(duì)照組給予生理鹽水10ml/kg雙后肢肌肉注射。治療組在肌注甘油前15min給予山莨菪堿10mg/kg腹腔注射。各組根據(jù)觀察時(shí)間又分為三個(gè)亞組：1小時(shí)組、6小時(shí)組和24小時(shí)組。⑵應(yīng)用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)生化指標(biāo)；

3、進(jìn)行HE染色，用光學(xué)顯微鏡觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變；采用HO-1降解血紅素生成膽紅素和CO原理，測(cè)定腎組織勻漿中膽紅素生成量代表HO-1活性；應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)腎組織中HO-1、HIF-1α的表達(dá)，并用病理圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析。⑶所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所得結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±s）表示。組間比較采用單因素方差（one-way ANOVA）分析，相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)檢驗(yàn)，以P<0.05為有

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：①AKI模型1小時(shí)組SCr和CK增高（P<0.05或P<0.01），6小時(shí)組血清SCr、BUN及CK均明顯增高（P<0.01），24小時(shí)組上述指標(biāo)增加更明顯（P<0.01）。山莨菪堿組與AKI模型組比較，血清SCr、BUN和CK均明顯降低（P<0.05或P<0.01），但仍高于正常對(duì)照組（P<0.01）。②正常對(duì)照組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯變化，AKI模型1小時(shí)組腎組織內(nèi)可見(jiàn)少量管型，上皮細(xì)胞腫脹，6小時(shí)

5、組管型增加，并出現(xiàn)玻璃樣變性及間質(zhì)充血，24小時(shí)組出現(xiàn)腎小管壞死。山莨菪堿組上皮細(xì)胞變性、壞死程度較AKI模型組明顯減輕。③正常對(duì)照組各亞組HO-1活性均較低。AKI模型6小時(shí)組、24小時(shí)組大鼠腎組織中HO-1活性較正常對(duì)照組大鼠顯著升高（P<0.01），山莨菪堿6小時(shí)組及24小時(shí)組均較同時(shí)間點(diǎn)AKI模型組顯著增高（P<0.05）。④HO-1在正常對(duì)照組大鼠腎組織中表達(dá)較少，主要表達(dá)在近端和遠(yuǎn)端腎小管。AKI模型1小時(shí)組HO-1表達(dá)稍增

6、強(qiáng)，與正常對(duì)照組無(wú)差異（P>0.05），6小時(shí)組、24小時(shí)組表達(dá)顯著增強(qiáng)，與正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。山莨菪堿1小時(shí)組HO-1表達(dá)與正常對(duì)照組、AKI模型1小時(shí)組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。山莨菪堿6小時(shí)組及24小時(shí)組HO-1表達(dá)均較同期AKI模型組顯著增強(qiáng)（P<0.01）。⑤正常對(duì)照組大鼠腎組織中表達(dá)較少，主要在遠(yuǎn)端腎小管表達(dá)。AKI模型1小時(shí)組HIF-1α表達(dá)略增強(qiáng)，但與正常對(duì)照組無(wú)差異（P>0.05），6小時(shí)組

7、表達(dá)顯著增強(qiáng)，與正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），24小時(shí)組表達(dá)較6小時(shí)更強(qiáng)（P<0.01）。山莨菪堿1小時(shí)組HIF-1α表達(dá)稍增強(qiáng)，與正常對(duì)照組、AKI模型1小時(shí)組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。山莨菪堿6小時(shí)及24小時(shí)組HIF-1α表達(dá)均較同時(shí)間點(diǎn)AKI模型組顯著增強(qiáng)（P<0.05）。⑥腎組織中HO-1活性與HIF-1α的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.846，P<0.01）。腎組織中HO-1表達(dá)與HIF-1α的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（

8、r=0.854，P<0.01）。
　　 結(jié)論：⑴大鼠肌注甘油可引起AKI，這種腎損傷可模擬人類(lèi)橫紋肌溶解引起的AKI。⑵甘油肌注可強(qiáng)化大鼠腎組織HIF-1α的表達(dá)，進(jìn)而使腎組織HO-1表達(dá)、活性增強(qiáng)，這可能是甘油誘導(dǎo)AKI的自我保護(hù)機(jī)制。⑶山莨菪堿可通過(guò)上調(diào)腎組織HIF-1α、HO-1的表達(dá)，增強(qiáng)其活性，對(duì)甘油肌注誘導(dǎo)的AKI發(fā)揮腎臟保護(hù)作用，提示上調(diào)腎組織HIF-1α、HO-1的表達(dá)對(duì)甘油致AKI有腎臟保護(hù)作用，這為臨床AKI