EAE小鼠模型的構(gòu)建以及NKT細(xì)胞和Th1-Th2細(xì)胞因子的作用研究.pdf

1、目的：多發(fā)性硬化(MS)是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)脫髓鞘病變?yōu)樘攸c(diǎn)，遺傳易感個(gè)體與環(huán)境因素作用發(fā)生的自身免疫性疾病。由于多發(fā)性硬化的組織標(biāo)本不易獲得，為了系統(tǒng)的研究MS的發(fā)病機(jī)制、病理改變，就需要建立一個(gè)穩(wěn)定可靠的多發(fā)性硬化動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白多肽誘導(dǎo)C57BL/6小鼠，嘗試建立多發(fā)性硬化的動(dòng)物模型—實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎，并初步討NKT細(xì)胞和Th1/Th2細(xì)胞因子在其發(fā)病機(jī)制中的作用，為進(jìn)一步開(kāi)展對(duì)多發(fā)性硬化發(fā)病機(jī)制

2、和防治方法的研究奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：⑴用含結(jié)核分枝桿菌的完全弗氏佐劑加300ugMOG35-55抗原免疫C57BL/6小鼠，同時(shí)在第一次免疫(第0天)后立即和第2天給予腹腔注射0.1ml百日咳桿菌菌液，誘導(dǎo)C57BL/6小鼠的EAE模型。通過(guò)對(duì)小鼠體重，癥狀及中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理改變的觀察，評(píng)估EAE模型的建立情況。⑵應(yīng)用SYBR熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠神經(jīng)組織(腦組織和脊髓組織)中干擾素-gamma(Interferon-γ

3、，IFN-γ)mRNA，白細(xì)胞介素-10(Interleukin-10，IL-10)mRNA的表達(dá)情況；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)直接熒光標(biāo)記抗體(FITC-CD1d，PE-B7-H1，PE-B7-H2)檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞膜上CD1d，B7-H1，B7-H2分子分別的表達(dá)情況。通過(guò)比較模型組與對(duì)照組的不同，初步探討NKT細(xì)胞和Th1/Th2細(xì)胞因子在EAE中的作用，為進(jìn)一步開(kāi)展對(duì)MS發(fā)病機(jī)制和防治方法的究奠定基礎(chǔ)。
　　 結(jié)果：①模型組的發(fā)

4、病率為65％，最高臨床癥狀神經(jīng)功能評(píng)分可達(dá)5分，且腦脊髓組織切片顯示血管周圍出現(xiàn)密集的袖套樣炎性細(xì)胞，浸潤(rùn)的細(xì)胞類型以淋巴細(xì)胞為主，也可見(jiàn)少量膠質(zhì)細(xì)胞?；野踪|(zhì)均受累，腦白質(zhì)神經(jīng)纖維束問(wèn)、腦膜和脊膜也發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。②實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示目的基因IFN-γ mRNA的表達(dá)量，與劉照組IFN-γACT值(12.70±0.16)相比，模型組下降為(10.89±0.52)，P＜0.05；IL-10mRNA表達(dá)量與對(duì)照組IL-10ACT值

5、(17.36±1.01)相比，模型組升高為(19.12±0.61)，P＜0.05。③流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與對(duì)照組小鼠脾細(xì)胞懸液中表達(dá)CD1d分子的細(xì)胞數(shù)量百分率均數(shù)(9.32±1.07)％相比，模型發(fā)病高峰期百分率均數(shù)為(2.09±0.26)％，而模型組緩解期小鼠脾細(xì)胞懸液中表達(dá)CD1d分子的細(xì)胞數(shù)量百分率為(13.8±1.93)％，各組之間的差別比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與對(duì)照組表達(dá)膜共刺激分子B7H1分子的細(xì)胞占脾淋巴細(xì)胞

6、百分率均數(shù)(55.01±3.12)％比較，發(fā)病組百分率均數(shù)為(68.23±4.84)％明顯升高(P＜0.05)。與對(duì)照組表達(dá)膜共刺激分子B7H2分子的細(xì)胞占脾淋巴細(xì)胞百分率均數(shù)(22.59±2.87)％比較，發(fā)病組百分率均數(shù)為(30.21±3.37)％也明顯增高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴將MOG35-55與CFA完全乳化后，背部皮下免疫C57BL/6小鼠，外加腹腔注射百日咳菌液，成功的構(gòu)建了C57BL/6慢性復(fù)發(fā)-緩解型