苦馬豆素對(duì)孕小鼠Th1-Th2平衡及相關(guān)細(xì)胞因子調(diào)控作用的研究.pdf

1、目的:苦馬豆素是黃芪屬和棘豆屬等有毒植物的主要毒素，可引起以運(yùn)動(dòng)和繁殖障礙為主的中毒癥狀。本試驗(yàn)以妊娠Balb/c小鼠為試驗(yàn)動(dòng)物，灌服苦馬豆素，觀察卵巢病變，檢測(cè)生殖免疫相關(guān)的細(xì)胞因子，探究苦馬豆素對(duì)妊娠小鼠Th1/Th2細(xì)胞平衡和生殖免疫關(guān)鍵細(xì)胞因子的調(diào)控作用，推測(cè)苦馬豆素致山羊流產(chǎn)的免疫因素，為苦馬豆素致流產(chǎn)的機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:本試驗(yàn)以8周齡Balb/c小鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物，按照雄雌比為1∶3的比例進(jìn)行合籠交配。將妊娠

2、小鼠分為5組，自小鼠妊娠第8天起，分別按照劑量0、0.2、0.4、0.8、1.6 mg/kg/d灌服苦馬豆素溶液。妊娠第20天，解剖小鼠，采集卵巢，制作病理切片，觀察卵巢細(xì)胞的病理變化;采集血清，采用ELISA技術(shù)檢測(cè)各組小鼠血清中IL-1β、IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ濃度，分析苦馬豆素對(duì)血清中生殖免疫關(guān)鍵的細(xì)胞因子的調(diào)控作用;采集脾臟，提取總RNA，通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)脾臟中IL-1β、IL-4、IL-10、IFN

3、-γ的mRNA基因水平，分析苦馬豆素對(duì)這些細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄過(guò)程的調(diào)控作用;分離外周血淋巴細(xì)胞，用PMA和粒子霉素刺激T細(xì)胞，采用三色法標(biāo)記Th1/Th2細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th1/Th2細(xì)胞亞群比例，分析苦馬豆素對(duì)外周血Th1/Th2細(xì)胞亞群的作用。
　　結(jié)果:病理切片顯示，苦馬豆素劑量在0.2 mg/kg/d時(shí)，即觀察到卵巢中有少量的細(xì)胞出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象，隨著劑量的增加，空泡化現(xiàn)象更加明顯，并伴有細(xì)胞核腫脹、固縮，細(xì)胞壞死等現(xiàn)象，說(shuō)

4、明孕小鼠灌服SW后出現(xiàn)苦馬豆素中毒的典型病變。對(duì)小鼠血清中IL-1β、IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ的濃度進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)苦馬豆素可顯著提高IL-1β、TFN-α和IFN-γ的濃度，且隨著劑量的增加，濃度有上升趨勢(shì)，呈現(xiàn)正相關(guān)性;灌服苦馬豆素水溶液后，IL-4和IL-10的血清濃度有所下降，其中苦馬豆素劑量在0.2 mg/kg/d時(shí)，IL-4的血清濃度最低，隨著劑量的增加，IL-4的濃度有所上升，但仍顯著低于對(duì)照組，IL-1

5、0的濃度隨著劑量的增加而降低，呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性。對(duì)外周血淋巴細(xì)胞中Th1/Th2細(xì)胞亞群進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)灌服苦馬豆素后，小鼠的Th1型細(xì)胞的數(shù)量比有所上升，Th2型細(xì)胞的比例下降，Th1/Th2細(xì)胞亞群平衡向Th1型細(xì)胞因子傾斜。
　　結(jié)論:苦馬豆素具有顯著的免疫調(diào)節(jié)作用，可促進(jìn)孕小鼠Th1型細(xì)胞增殖和分化，增加IL-1β、TNF-γ和IFN-α的血清濃度，抑制Th2型細(xì)胞的增殖分化和細(xì)胞活性，降低IL-4和IL-10的細(xì)胞因子水平。推