下丘腦室旁核—垂體—甲狀腺胃動素的表達、調(diào)控及對胃運動的影響研究.pdf

1、目的:
　　 觀察胃動素(MTL)在下丘腦室旁核(PVN)、垂體及甲狀腺的表達,比較甲狀腺與小腸MTLmRNA基因序列的異同;探討MTL活性肽及其前體mRNA在甲狀腺良、惡性腫瘤組織中表達的差異及臨床意義;
　　 探討下丘腦PVN-垂體-甲狀腺對甲狀腺胃動素分泌及胃運動的調(diào)控,以及甲狀腺胃動素對下丘腦PVN、垂體MTL表達的反饋調(diào)控;
　　 研究人甲狀腺髓樣癌(TT)細胞MTL的表達、分泌和調(diào)控,闡明MTT在TT

2、細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用和臨床意義。
　　 方法:
　　 1.采用熒光免疫組化技術,觀察下丘腦PVN、垂體及甲狀腺內(nèi)MTL的定位和定性表達;采用實時熒光定量PCR(Real-timePCR)、SouthernBlot和分子克隆、熒光免疫組化雙染等技術,觀察人甲狀腺和小腸MTL前體mRNA基因序列異同;比較MTL,前體mRNA和蛋白在正常甲狀腺和甲狀腺良、惡性腫瘤組織中表達的異同。
　　 2.采用在體胃運動和放

3、射免疫方法,觀察刺激/損毀下丘腦PVN、摘除垂體或甲狀腺大鼠胃竇移行性復合運動(MMC)Ⅲ期變化及血漿三碘甲腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)和MTL含量的改變;采用Real-timePCR法,觀察電刺激/損毀下丘腦PVN及摘除甲狀腺對下丘腦-垂體-甲狀腺MTL前體mRNA表達的影響;采用免疫組化法,觀察刺激/損毀下丘腦PVN對甲狀腺MTL表達的改變,及甲狀腺摘除對PVN內(nèi)c-Fos表達的影響。
　　 3.采用Southernb

4、lot、Westernblot和熒光免疫細胞化學技術檢測TT細胞內(nèi)MTLmRNA和蛋白表達,應用Smallinterfering(siRNA)技術、MTT實驗、Transwell實驗和劃痕實驗分析MTL基因表達對TT細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　 結果:
　　 1.大鼠下丘腦PVN、垂體、甲狀腺及人垂體、甲狀腺組織均可見MTL免疫陽性細胞的表達,且在甲狀腺MTL與降鈣素(CT)共表達于同一細胞,即甲狀腺C細胞。<

5、br>　　 2.人甲狀腺MTL前體mRNA基因序列與基因庫報道的人小腸MTL,前體mRNA基因序列(BC112314,NCBI,美國)相同。
　　 3.正常人甲狀腺和甲狀腺腫瘤組織內(nèi)均有MTL和MTL前體mRNA的表達,其中甲狀腺髓樣癌MTL及其前體mRNA的表達顯著高于正常甲狀腺、甲狀腺乳頭狀癌、濾泡癌、嗜酸性腺瘤及結節(jié)性甲狀腺腫(P＜0.01);而甲狀腺乳頭狀癌和濾泡癌MTL及其前體mRNA的表達明顯低于正常甲狀腺、嗜酸性

6、腺瘤及結節(jié)性甲狀腺腫(P＜0.05);結節(jié)性甲狀腺腫和嗜酸性腺瘤與正常甲狀腺相比,MTL及其前體mRNA的表達無顯著差異(P＞0.05)。
　　 4.下丘腦PVN對胃動素分泌及胃運動的影響結果顯示,電刺激下丘腦PVN可使大鼠血漿和甲狀腺MTL,含量顯著增高(P＜0.05),垂體和甲狀腺MTL前體mRNA表達顯著增加(P＜0.05),胃竇MMCⅢ期樣收縮明顯增強(P＜0.05),該作用可部分被MTL受體拮抗劑GM-109阻斷(P＜

7、0.05);而電刺激甲狀腺摘除的大鼠PVN,與甲狀腺摘除假手術組相比,其血漿MTL含量顯著降低(P＜0.05),胃竇MMCⅢ期樣收縮明顯減弱(P＜0.05)。電損毀PVN后,大鼠血漿和甲狀腺內(nèi)MTL含量顯著降低(P＜0.05),甲狀腺和垂體內(nèi)MTL前體mRNA表達顯著降低(P＜0.05),胃竇MMCⅢ期樣收縮明顯減弱(P＜0.05)。
　　 5.垂體對胃運動的影響研究結果顯示,在垂體摘除大鼠,MMCⅢ期收縮頻率顯著減慢(P＜0.

8、05),PVN注射MTL,與垂體摘除+PVN注射NS組比較,MMC的收縮頻率顯著增加(P＜0.01),但與假手術垂體摘除+PVN注射MTL組比較,MMCⅢ期收縮頻率顯著降低(P＜0.05)。
　　 6.甲狀腺對胃動素的分泌、胃運動的影響以及對下丘腦PVN、垂體MTL表達的反饋調(diào)控研究顯示,甲狀腺摘除后,大鼠血漿MTL含量顯著減少(2d,P＜0.01;4d,P＜0.05),下丘腦和垂體MTLmRNA表達顯著增加(2d,P＜0.05

9、),胃竇MMCⅢ期樣收縮活動明顯減弱(2d,P＜0.01:4d,P＜0.05),PVN內(nèi)c-Fos表達顯著增加(2h,P＜0.05)。
　　 7.TT細胞MTL的表達、分泌和調(diào)控研究顯示,TT細胞內(nèi)有大量MTL免疫陽性物及其前體mRNA的表達,且MTL與CT共表達于同一細胞;TT細胞可分泌MTL,且生長素(GH)和促甲狀腺激素(TSH)可顯著促進TT細胞MTL的分泌(P＜0.05);MTL,可顯著促進TT細胞的增殖(P＜0.05

10、),干擾MTL基因表達可顯著抑制TT細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1.甲狀腺和TT細胞有MTL及其前體mRNA表達,且MTL與CT共表達于C細胞。
　　 2.人甲狀腺和人小腸MTL,前體mRNA基因序列相同。
　　 3.MTL及其前體mRNA在甲狀腺髓樣癌呈高表達,而在甲狀腺乳頭狀癌和濾泡癌呈低表達。
　　 4.MTL參與下丘腦PVN-垂體-甲狀腺胃運動的調(diào)控,甲狀