尼古丁對(duì)下丘腦室旁核神經(jīng)內(nèi)大細(xì)胞神經(jīng)元活動(dòng)的影響.pdf

1、目的：在大鼠急性腦片上，利用全細(xì)胞膜片鉗記錄結(jié)合生物素染色技術(shù)和神經(jīng)藥理學(xué)手段研究尼古丁對(duì)下丘腦室旁核（PVN）神經(jīng)內(nèi)大細(xì)胞神經(jīng)元的自發(fā)性放電頻率、膜電位及突觸后電流的影響機(jī)制。
　　方法：生后14-21天（Postnatal day14-21,P14-P21）的Wistar雄性大鼠，使用異氟烷麻醉后斷頭取腦，使用振動(dòng)切片機(jī)制備厚度為250μm內(nèi)含PVN的下丘腦切片。在室溫下，將下丘腦切片置于沖95％O2和5%CO2混合氣體的人工

2、腦脊液中孵育1小時(shí)以上。人工腦脊液由以下成分構(gòu)成(in mM)：118 NaCl,3 KCl,1 MgCl2.6H2O,1 NaH2PO4.2H2O,25 NaHCO3,10 D-Glucose,2 CaCl2; pH:7.3-7.4,滲透壓為295-305 mOsM。記錄電極內(nèi)灌裝10微升電極內(nèi)液，電極阻抗為4-6 MΩ。聯(lián)合全細(xì)胞膜片鉗、生物素染色和神經(jīng)藥理學(xué)手段研究尼古丁對(duì)PVN神經(jīng)內(nèi)大神經(jīng)元自發(fā)性放電頻率、膜電位和sIPSP的影

3、響。神經(jīng)元全細(xì)胞膜片鉗記錄是通過(guò)Axon-700B膜片鉗放大器、Digidata1400A系列數(shù)模轉(zhuǎn)換器、Clampex10.4數(shù)據(jù)包和電腦來(lái)實(shí)現(xiàn)的，數(shù)據(jù)采集后存于移動(dòng)硬盤(pán)和DVD光盤(pán)用于分析，只有記錄完整且基線穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用于數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后切片用4%多聚甲醛固定，用ABC試劑盒進(jìn)行染色，封片，照相，分析記錄細(xì)胞的組織學(xué)特征。電生理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用Clampfit10.4軟件，采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，均數(shù)

4、的比較采用配對(duì)T檢驗(yàn)，P<0.05時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：⑴在電流鉗記錄模式下，灌流尼古丁(1μM)可導(dǎo)致38.7%的PVN神經(jīng)內(nèi)大細(xì)胞神經(jīng)元放電頻率降出現(xiàn)可逆性降低，伴有膜電位超極化。⑵尼古丁對(duì)PVN神經(jīng)內(nèi)大細(xì)胞神經(jīng)元自發(fā)性活動(dòng)的抑制作用具有劑量依存性，半數(shù)有效抑制濃度為17μM。⑶尼古丁對(duì)PVN神經(jīng)內(nèi)大細(xì)胞神經(jīng)元自發(fā)性活動(dòng)的抑制作用對(duì)河豚毒素（TTX，0.5μM）敏感，同時(shí)TTX可阻斷神經(jīng)元自發(fā)性動(dòng)作電位的發(fā)生以及尼古