尼古丁對大鼠下丘腦室旁核小細胞神經元活動的影響.pdf

1、目的：下丘腦室旁核（PVN）小細胞神經元調控自主神經活動，在心血管功能、神經內分泌活動及能量代謝調節(jié)方面起重要作用。在體實驗研究表明，尼古丁可活化PVN神經元煙堿樣受體，影響攝食、能量代謝和神經內分泌功能，然而在離體條件下，活化煙堿樣受體對PVN小細胞神經元活動影響機制尚無報道。因此，本研究聯(lián)合應用膜片鉗記錄、組織化學和神經藥理學等技術手段，在新生大鼠下丘腦切片上觀察尼古丁對大鼠下丘腦小細胞神經元自發(fā)性放電和興奮性突觸后電流（sEPSC

2、）活動的影響；研究尼古丁對自發(fā)性活動影響的劑量依存性以及半數有效濃度；探討 PVN內尼古丁敏感小細胞神經元的組織學特征；明確尼古丁對 PVN小細胞神經元的影響機制，有助于闡明尼古丁對心血管及下丘腦神經內分泌功能活動的調節(jié)機理。
　　方法：出生后14-21d的Wistar雄性的大鼠。使用異氟烷深度麻醉后，斷頭取腦，使用萊卡1200S全自動振動切片機制備厚度為250μm、內含PVN的下丘腦切片。在室溫下，將下丘腦切片置于充95％O2和

3、5%CO2混合氣體的人工腦脊液中孵育1h以上。人工腦脊液由以下成分構成(in mM)：118 NaCl,3 KCl,1 MgCl2·6H2O,1 NaH2PO4·2H2O,25 NaHCO3,10 D-Glucose,2 CaCl2;PH:7.3-7.4,滲透壓為295-305 mOsM。記錄電極內灌裝10μl內液，電極阻抗為4-6 MΩ。聯(lián)合應用全細胞膜片鉗、生物素染色和神經藥理學手段研究尼古丁對PVN小細胞神經元自發(fā)性放電頻率、膜電

4、位和sEPSCs的影響。PVN神經元全細胞膜片鉗記錄是通過Axon-700B膜片鉗放大器、Digidata1400A系列數模轉換器、Clampex10.4數據包和電腦來實現的，數據采集后存于移動硬盤和DVD光盤用于分析，只有記錄完整且基線穩(wěn)定的實驗數據用于數據處理和統(tǒng)計學分析。實驗結束后腦片用4%多聚甲醛在室溫下固定24h后，然后置于生物素復合物中過夜。通過 DAB組織化學檢測生物素分布，顯微鏡下分析記錄細胞的組織學特征。采用Clamp

5、fit10.4軟件對電生理實驗數據進行分析，采用SPSS軟件進行數據統(tǒng)計學分析，均數的比較采用配對T檢驗，P<0.05認為有統(tǒng)計學差異。
　　結果：⑴PVN小細胞神經元胞體平均直徑為12.6±1.10μm，樹突個數為2-6個；自發(fā)性放電頻率為2.21±0.24 Hz，平均膜電位為-54.7±1.3mV。⑵在電流鉗記錄模式下，灌流尼古丁(1μM)可使46.6%的PVN小細胞神經元產生可逆性膜電位去極化和放電頻率增加。⑶尼古丁對部分P