不同來(lái)源紫花苜蓿瘤胃體外發(fā)酵特性及葉圍細(xì)菌區(qū)系的比較研究.pdf

1、紫花苜蓿是多年生優(yōu)質(zhì)豆科牧草，我國(guó)可種植地域廣闊，但不同地區(qū)、不同生長(zhǎng)年限、不同茬次及不同物候期的苜蓿營(yíng)養(yǎng)價(jià)值有所不同。本試驗(yàn)采用瘤胃體外發(fā)酵技術(shù)比較研究了不同來(lái)源紫花苜蓿的瘤胃體外發(fā)酵特性，同時(shí)利用PCR-DGGE技術(shù)分析了不同物候期、不同茬次紫花苜蓿葉圍細(xì)菌區(qū)系變化，探究葉圍菌群變化與物候期的關(guān)系。試驗(yàn)以3頭裝有永久性瘤胃瘺管的荷斯坦奶牛為瘤胃液供體，稱(chēng)量1g苜蓿樣品于含有10mL瘤胃液和90 mL培養(yǎng)基的發(fā)酵瓶?jī)?nèi)，39℃體外發(fā)酵9

2、6 h，分別于24、48、72及96 h冰浴終止發(fā)酵，測(cè)定產(chǎn)氣量、甲烷產(chǎn)量、底物降解率、pH、VFA、NH3-N及MCP濃度。PCR擴(kuò)增葉圍細(xì)菌16S rRNA的V6～V8區(qū)，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DGGE電泳后進(jìn)行相似性分析。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.不同物候期刈割紫花苜蓿體外發(fā)酵特性的比較研究
　　本試驗(yàn)采集新疆呼圖壁2012年第一茬刈割的現(xiàn)蕾期、初花期及盛花期共3個(gè)苜蓿草樣品，比較研究不同物候期刈割對(duì)紫花苜蓿體外發(fā)酵特性的影響。結(jié)果

3、顯示:不同物候期刈割對(duì)紫花苜蓿體外發(fā)酵產(chǎn)氣量、底物降解率、VFA、氨態(tài)氮和菌體蛋白濃度有顯著影響（P＜0.05）?，F(xiàn)蕾期苜蓿產(chǎn)氣量、VFA濃度顯著高于初花期(P＜0.05);現(xiàn)蕾期苜蓿底物降解率、NH3-N和MCP濃度顯著高于盛花期（P＜0.05）;初花期刈割苜蓿的底物降解率顯著高于盛花期(P＜0.05)。綜合苜蓿營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)以及體外發(fā)酵情況，以現(xiàn)蕾期苜蓿營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最佳。
　　2.不同生長(zhǎng)年限刈割紫花苜蓿體外發(fā)酵特性的比較研究
　

4、　本試驗(yàn)采集甘肅蘭州2008、2009和2011年種植，2012年刈割，即生長(zhǎng)年限分別為4年齡、3年齡、1年齡的第一茬、第二茬及第三茬共9個(gè)苜蓿草樣品，比較研究不同生長(zhǎng)年限刈割對(duì)紫花苜蓿體外發(fā)酵特性的影響。結(jié)果表明，不同生長(zhǎng)年限刈割對(duì)紫花苜蓿體外發(fā)酵產(chǎn)氣量、底物降解率、VFA、氨態(tài)氮和菌體蛋白濃度有顯著影響(P＜0.05)，第一茬中，1年齡苜蓿產(chǎn)氣量、甲烷產(chǎn)量、底物降解率、NH3-N和MCP濃度最高（P＜0.05），4年齡苜蓿丁酸濃度最

5、高，甲烷產(chǎn)量、NH3-N和MCP濃度最低（P＜0.05），3年齡苜蓿產(chǎn)氣量、底物降解率、丁酸濃度最低（P＜0.05）;第二茬中，1年齡苜蓿甲烷產(chǎn)量、底物降解率、丙酸、NH3-N、MCP濃度最高(P＜0.05)，4年齡苜蓿產(chǎn)氣量、丁酸、總VFA濃度最高(P＜0.05)，3年齡苜蓿均為最低（P＜0.05）;第三茬中，1年齡苜蓿產(chǎn)氣量、甲烷產(chǎn)量、丙酸、MCP濃度最高（P＜0.05），4年齡苜蓿底物降解率、NH3-N濃度最高(P＜0.05)，3

6、年齡苜蓿均為最低（P＜0.05）。綜合分析營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)及體外發(fā)酵參數(shù)表明，1年齡和4年齡苜蓿營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高于3年齡苜蓿。
　　3.不同地區(qū)、不同茬次刈割紫花苜蓿體外發(fā)酵特性的比較研究
　　本試驗(yàn)采集寧夏固原、甘肅蘭州、新疆呼圖壁、江蘇揚(yáng)州等四個(gè)地區(qū)的第一茬、第二茬及第三茬共12個(gè)苜蓿草樣品，比較研究不同地區(qū)、不同茬次刈割對(duì)紫花苜蓿體外發(fā)酵特性的影響。結(jié)果表明，不同地區(qū)、不同茬次及其互作效應(yīng)對(duì)苜蓿體外發(fā)酵產(chǎn)氣量、底物降解率、VFA、N

7、H3-N和MCP濃度等有顯著影響（P＜0.05）。新疆苜蓿產(chǎn)氣量、甲烷產(chǎn)量和VFA濃度最高（P＜0.05），寧夏苜蓿底物降解率、NH3-N濃度最高（P＜0.05）;各地區(qū)第三茬苜蓿的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高，第二茬最低，第一茬居中(P＜0.05);綜合各地區(qū)、各茬次結(jié)果，以新疆第三茬和甘肅第三茬苜蓿營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高，甘肅第二茬和江蘇第二茬苜蓿營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最低。
　　4.不同物候期、不同茬次紫花苜蓿葉圍細(xì)菌區(qū)系變化
　　本試驗(yàn)采集江蘇揚(yáng)州第一茬現(xiàn)

8、蕾期、初花期、盛花期及第二茬初花期苜蓿，利用PCR-DGGE技術(shù)分析了不同物候期、不同茬次紫花苜蓿葉圍細(xì)菌區(qū)系的變化，探究葉圍菌群變化與物候期的關(guān)系。PCR擴(kuò)增葉圍細(xì)菌16S rRNA的V6～V8區(qū)，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DGGE電泳后進(jìn)行相似性分析。結(jié)果表明，第一茬初花期和盛花期苜蓿條帶圖譜分布相似。不同物候期、不同茬次苜蓿的多樣性指數(shù)差異顯著（P＜0.05），現(xiàn)蕾期和盛花期苜蓿顯著高于初花期苜蓿(P＜0.05);第一茬苜蓿顯著高于第二茬苜蓿(P