2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、蘋果(Malus domestica Borkh.)是我國主要的經濟果樹之一,近年來隨著環(huán)境污染以及土壤重金屬化不斷加重,使得蘋果Ca2+流失增加,生理代謝紊亂,產量和品質不同程度的降低。鈣反向轉運體(Ca2+/H+ antiporters,CAXs)是一類重要的跨膜轉運蛋白,是調節(jié)胞內外Ca2+平衡重要的外向轉運體,在植物營養(yǎng)和離子轉運上起著非常關鍵的作用。目前很多CAXs基因已經被克隆,且在模式植物中得以轉化,但在木本植物中研究的很

2、少。為提高蘋果對Ca2+的吸收轉運以及提高抗逆性,本實驗在前人的研究基礎上,搜索蘋果全基因組,鑒定蘋果CAXs基因家族成員,并進行了生物信息學分析,然后從蘋果cDNA中克隆MdCAX1基因全長,構建了sMdCAX1基因的植物雙元表達載體,采用農桿菌介導的方法導入‘長富6號’中,獲得轉基因植物。主要研究結果如下:
  1.利用生物信息學的方法對蘋果MdCAXs基因家族進行染色體定位、等電點、親疏水性、跨膜區(qū)域、亞細胞定位及保守結構域

3、進行了預測和分析,還分析了MdCAXs基因與其他物種CAXs基因的進化關系。用實時熒光定量RT-PCR法對蘋果MdCAXs基因在不同鹽處理下根、莖、葉中的表達變化進行分析。結果表明,蘋果MdCAXs家族包含8個成員,分別屬于CAXsⅠ型中的A亞型和B亞型,編碼的氨基酸在436~817個氨基酸之間,等電點在4.97~7.12之間,且都為疏水性蛋白;所有MdCAXs基因編碼的氨基酸都有11個及以上的跨膜區(qū)域,含有CAX基因5個典型的功能域:

4、N-端自抑制區(qū)域(NRR)、C-端功能區(qū)域、Ca2+功能域(CaD)、C功能域和D功能域。亞細胞定位預測發(fā)現MdCAXs主要是定位在質膜和內質網上。蘋果MdCAXs基因具有組織特異性表達特點,不同的鹽處理根、莖、葉中表達發(fā)生不同程度的變化,反映了MdCAX存在功能上的差異,對不同陽離子有特異性的應答反應。
  2.根據NCBI登陸的MdCAX1基因序列設計引物,從蘋果葉片中克隆MdCAX1基因的ORF框,以克隆的ORF框為模版克隆

5、編碼去除N末端序列的sMdCAX1基因,獲得一段大小為1272 bp的片段。通過對MdCAX1基因ORF框酶切位點的分析,發(fā)現序列中在第413 bp和658 bp處有兩個SacⅠ位點,利用重疊PCR的方法以sMdCAX1基因為模版,將序列中的SacⅠ位點進行定點突變,獲得大小為1272 bp的突變序列sORF1+2Mu。同時構建pYH4215-sMd1植物雙元表達載體,將該表達載體導入農桿菌菌株EHA105中。
  3.以‘長富6

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