‘蜂蜜罐’棗不同外植體再生能力與轉(zhuǎn)化Bt基因初探.pdf

1、棗是棗屬（ziziphus Mill）植物，是我國重要的經(jīng)濟(jì)樹種。棗樹中存在棗花小、人工去雄授粉困難、坐果率低，大多不含種仁、且胚敗育現(xiàn)象嚴(yán)重等因素。同時(shí)，棗樹在生產(chǎn)上蟲害嚴(yán)重，嚴(yán)重制約著棗產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。傳統(tǒng)的育種方法很難得到雜種后代，基因工程已成為改良育種的有效手段。本研究選用鮮食棗品種——蜂蜜罐。以蜂蜜罐不同外植體（葉片、子葉、莖段、上胚軸切段、下胚軸切段、根）為試材，建立棗不同外植體再生體系，為棗遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ);另外，以蜂蜜罐

2、實(shí)生苗葉片為外植體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將進(jìn)行Bt基因遺傳轉(zhuǎn)化研究，并對(duì)pBar13-Cry2A*和pBar13-Cry1C*進(jìn)行植物載體改造，以期獲得棗抗蟲新種質(zhì)。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.蜂蜜罐不同外植體再生體系的建立
　　(1)胚培養(yǎng):種胚在WPM+ GA30.3 mg/L的培養(yǎng)基中胚軸生長(zhǎng)最好;光培養(yǎng)30 d長(zhǎng)成完整的植株。
　　(2)莖段再生體系:以MS為基本培養(yǎng)基，研究6-BA和IAA對(duì)不定芽再生的影響，研究

3、結(jié)果表明，當(dāng)6-BA濃度達(dá)到1.5 mg/L，IAA濃度達(dá)到0.1 mg/L時(shí)出愈率和出芽率達(dá)到最高，為80％和100％，且生長(zhǎng)良好;最終確定最適合蜂蜜罐棗胚培苗莖段不定芽再生的培養(yǎng)基為:MS+6-BA1.5 mg/L+ IAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L;將再生的不定芽接種至以1/2MS+0.5 g/LAC為基本培養(yǎng)基中，研究IBA和NAA對(duì)不定根再生的影響，研究結(jié)果表明，當(dāng)IBA濃度達(dá)到0.5 mg/L時(shí)生根數(shù)較多

4、，生根率較高，為60％，最終確定不定根誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為1/2MS+ AC0.5 g/L+ IBA0.5 mg/L;
　　(3)葉片、子葉再生不定芽:培養(yǎng)40d左右的試管苗葉片（垂直主脈橫切2～3刀，不傷及葉緣）和子葉（橫切2～3刀，遠(yuǎn)軸面接觸培養(yǎng)基）分別接種至WPM+ NAA0.2 mg/L+ TDZ0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L和WPM+NAA0.2 mg/L+ TDZ0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/

5、L，暗培養(yǎng)10d后，產(chǎn)生愈傷組織，培養(yǎng)40 d后，形成不定芽;
　　(4)上胚軸切段再生不定芽誘導(dǎo):上胚軸切段接種以MS+ AgNO30.5 mg/L為基本培養(yǎng)基，研究6-BA和NAA對(duì)不定芽再生的影響;研究結(jié)果表明，當(dāng)6-BA濃度為1.0 mg/L和NAA濃度為0.1 mg/L時(shí)，出愈率達(dá)94％，不定芽再生率達(dá)63％，最終確定上胚軸切段再生不定芽的最佳配方為MS+6-BA1.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30

6、.5 mg/L;
　　(5)下胚軸切段再生不定芽誘導(dǎo):將下胚軸切段，接至3種不同培養(yǎng)基中，研究結(jié)果表明在MS+2，4-D1.5mg/L+6-BA0.5 mg/L;出愈率高達(dá)94％，培養(yǎng)15d左右出現(xiàn)不定芽點(diǎn)，培養(yǎng)30 d后形成不定芽，不定芽再生率達(dá)29％;
　　(6)根再生不定芽誘導(dǎo):將完整根直接接入MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.5 mg/L+PVP1.0 g/L的培養(yǎng)基中;培養(yǎng)約10d根表面出現(xiàn)愈傷，培養(yǎng)30d