毒殺天牛的Bt基因轉(zhuǎn)化菊花的研究.pdf

1、菊花在我國有悠久的栽培歷史,是世界上最重要的觀賞花卉之一。菊花除具有觀賞功能外,許多品種可以入藥。然而菊花在生長過程中常遭受多種蟲害,其中菊天牛危害最為嚴重。當菊花出售時,菊花上的微量蟲害就會影響菊花的銷售狀況,因此需要使用保護性的殺蟲劑來防止蟲害的發(fā)生。本研究利用基因工程技術將抗鞘翅目害蟲基因mBt886Cry3Aa導入菊花,獲得抗鞘翅目害蟲的轉(zhuǎn)基因菊花,并測定其對菊天牛的毒殺效果,為有效防治鞘翅目害蟲提供一個新途徑。研究結(jié)果如下:<

2、br>　　 1.菊花遺傳轉(zhuǎn)化再生體系的建立
　　 以菊花“北京黃”Dendrathema grandiflorum kitam莖段和莖尖為外植體,對最適分化培養(yǎng)基和最佳生根培養(yǎng)基進行篩選。結(jié)果表明,菊花“北京黃”莖段的最適分化培養(yǎng)基組合為MS+6-BA0.25 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1,分化率100％,且分化出的小苗長勢良好；菊花“北京黃”不定芽的最佳生根培養(yǎng)基組合為1/2MS+NAA0.05 mg·L-1,生

3、根率100％,且根粗而長；不同濃度的卡那霉素Kanamycin和頭孢噻肟鈉cefotaxime對菊花莖段分化和不定芽生根影響不同,15mg·L-1的卡那霉素可以抑制莖段的分化,10mg·L-1的卡那霉素完全抑制不定芽的生根,400mg·L-1的頭孢噻肟鈉不但可以有效地除去殘留的農(nóng)桿菌,還不影響菊花莖段的分化。
　　 2.含mBt886Cry3Aa基因的植物表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
　　 將含mBt886Cry3Aa基因的植物表

4、達載體凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌,經(jīng)PCR檢測,獲得含mBt886Cry3Aa基因的農(nóng)桿菌工程菌株材料。
　　 3.農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化菊花
　　 菊花“北京黃”莖段經(jīng)農(nóng)桿菌浸染后,在選擇分化培養(yǎng)基MS+6-BA0.25 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+km15 mg·L-1+cef400 mg·L-1上培養(yǎng),培養(yǎng)條件為光周期16h/8h,溫度25℃,經(jīng)繼代選擇培養(yǎng)篩選得到抗性苗,將其接種在選擇生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0

5、.05mg·L-1+km10mg·L-1上進行培養(yǎng),共得到33棵生根苗,再生苗8cm左右時,人工移栽室外生長。經(jīng)PCR檢測,得到7株轉(zhuǎn)mBt886Cry3Aa基因菊花。
　　 4.轉(zhuǎn)基因菊花對菊天牛室內(nèi)生物測定
　　 利用轉(zhuǎn)基因菊花對菊天牛進行室內(nèi)生物測定,將轉(zhuǎn)基因菊花與人工飼料以1:10的比例混合飼養(yǎng)菊天牛2齡幼蟲,B1、B2、B3、B4分別代表1-4號轉(zhuǎn)基因菊花。測試結(jié)果表明:菊天牛2齡幼蟲取食轉(zhuǎn)基因植株B4、B2、