Bt基因與ARA基因雙價(jià)抗蟲基因表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化油菜研究.pdf_第1頁(yè)
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1、新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文Bt基因與ARA基因雙價(jià)抗蟲基因表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化油菜研究姓名：鄭巨云申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：曲延英陳正華20080501AbstractBacillusthuringiesisgeneandAmaranthusretroflexusagglutiningenewereligatedintobivalentplantexpressionvector，whichencodetwolepido

2、pterresistanceandcoleopterousinsectresistanceproteinsThenthenewplantexpressionvectorwstransformedintapeseedbytheAgrobacteriummediatedmethodTheARAgeneandtheBtgenewereligatedintoprokaryotic(pET28a)expressionvectorAfterIPTG

3、inductiontheBtgeneexpressedafusionproteinwiththemolecularweightof737kDaandtheARAgeneexpressedafusionproteinwiththemolecularweightof36kDabySDSPAGEelectrophoresisTheresultisconsentaneouscomparedwiththeoriticalcomputationAl

4、ongwiththeinducingtimewasprolong，theexpressionofproteinWasgraduallyrisingtrendTheseresultsshowthattheARAgeneandtheBtgenecouldexpressinmicroorganism，butalsothereadingframeisintactthesegenesexpressionWasintegralTheARAgenea

5、ndtheBtgenewereligatedintoplantexpressionvector(pBI121)TheserecombinantplasmidsandpBIBtBAwereconfirmedbyrestrictionenzymeandPCRanalysisandtheresultsshowedthattheserecombinantplasmidswereconstructedsuccessfullyTheflgeneis

6、CaMV35SenhancersexpressionalelementsTheBSPgeneisphloem—specificpromoterTheserecombinantplasmidspBI—BtBAwereconfirmedbyrestrictionenzymeandPCRanalysisandtheresultsshowedthattheserecombinantplasmidswereconstructedsuccessfu

7、llyThenewplantexpressionvectorwstransformedintapeseedbytheAgrobacteriam—mediatedmethodandlasermicrobeampuncturemethodtoobtaintransgenicmpeThebivalentgeneWasinducedintapeseedwehadreceivedtransgenicrapeseedwhichWasdetected

8、byPCRanalysis，AgarosegeleleetrophoresisofDNArevealedthesizeofgenefragmentisaboutl8kband915bpPlantGenomeDNAWasdetectedbySouthernblottingTheresultsshowedthattherewas1or2hybridzonesintransgenicplanttherewasnothybridzonesinn

9、ontransgenicplantandasexpectedthereWas2hybridzonesinpositivecontrol，whichprovedthatBtBAgenesweresuccessfullytransformedintotobaccoTransgenicrapewithtolerancetothetestedpestweredemonstratedbybioassays，butalsothereadingfla

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