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1、新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文Bt基因與ARA基因雙價抗蟲基因表達載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化油菜研究姓名:鄭巨云申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):作物遺傳育種指導(dǎo)教師:曲延英陳正華20080501AbstractBacillusthuringiesisgeneandAmaranthusretroflexusagglutiningenewereligatedintobivalentplantexpressionvector,whichencodetwolepido
2、pterresistanceandcoleopterousinsectresistanceproteinsThenthenewplantexpressionvectorwstransformedintapeseedbytheAgrobacteriummediatedmethodTheARAgeneandtheBtgenewereligatedintoprokaryotic(pET28a)expressionvectorAfterIPTG
3、inductiontheBtgeneexpressedafusionproteinwiththemolecularweightof737kDaandtheARAgeneexpressedafusionproteinwiththemolecularweightof36kDabySDSPAGEelectrophoresisTheresultisconsentaneouscomparedwiththeoriticalcomputationAl
4、ongwiththeinducingtimewasprolong,theexpressionofproteinWasgraduallyrisingtrendTheseresultsshowthattheARAgeneandtheBtgenecouldexpressinmicroorganism,butalsothereadingframeisintactthesegenesexpressionWasintegralTheARAgenea
5、ndtheBtgenewereligatedintoplantexpressionvector(pBI121)TheserecombinantplasmidsandpBIBtBAwereconfirmedbyrestrictionenzymeandPCRanalysisandtheresultsshowedthattheserecombinantplasmidswereconstructedsuccessfullyTheflgeneis
6、CaMV35SenhancersexpressionalelementsTheBSPgeneisphloem—specificpromoterTheserecombinantplasmidspBI—BtBAwereconfirmedbyrestrictionenzymeandPCRanalysisandtheresultsshowedthattheserecombinantplasmidswereconstructedsuccessfu
7、llyThenewplantexpressionvectorwstransformedintapeseedbytheAgrobacteriam—mediatedmethodandlasermicrobeampuncturemethodtoobtaintransgenicmpeThebivalentgeneWasinducedintapeseedwehadreceivedtransgenicrapeseedwhichWasdetected
8、byPCRanalysis,AgarosegeleleetrophoresisofDNArevealedthesizeofgenefragmentisaboutl8kband915bpPlantGenomeDNAWasdetectedbySouthernblottingTheresultsshowedthattherewas1or2hybridzonesintransgenicplanttherewasnothybridzonesinn
9、ontransgenicplantandasexpectedthereWas2hybridzonesinpositivecontrol,whichprovedthatBtBAgenesweresuccessfullytransformedintotobaccoTransgenicrapewithtolerancetothetestedpestweredemonstratedbybioassays,butalsothereadingfla
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