胃腸道上皮性腫瘤淋巴管和血管組織病理學(xué)特點(diǎn)及其意義的研究.pdf

1、[研究目的]通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物D2-40以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(Vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)在胃腸道上皮性腫瘤中的表達(dá)，探討胃腸道粘膜內(nèi)上皮性腫瘤血管和淋巴管的分布特點(diǎn)；探索區(qū)分血管浸潤(rùn)(Blood vessel invasion，BVI)

2、和淋巴管浸潤(rùn)(Lymphatic vesselinvasion，LVI)的方法并且初步探討B(tài)VI和LVI在胃腸道上皮性腫瘤中的意義；初步探討VEGF和VEGF-C在不同階段胃腸道上皮性腫瘤中的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義。 [研究背景]胃腸道惡性腫瘤是危害人類(lèi)健康的主要惡性腫瘤。胃和結(jié)直腸都是重要的消化和吸收器官，富含淋巴管和血管。淋巴管和血管是腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程所需微環(huán)境中重要的兩個(gè)影響因子。目前的研究證實(shí)血管在腫瘤的生長(zhǎng)和播散過(guò)

3、程中發(fā)揮了重要作用。在常規(guī)HE組織切片中，淋巴管和血管往往難以區(qū)分。因此在出現(xiàn)淋巴管的特異性標(biāo)志物之前，關(guān)于惡性腫瘤新生淋巴管分布特點(diǎn)和腫瘤組織淋巴管浸潤(rùn)的研究較少。最近發(fā)現(xiàn)的淋巴管標(biāo)志物D2-40可以特異性的標(biāo)記新生淋巴管。聯(lián)合使用CD34和D2-40單克隆抗體可以區(qū)別淋巴管和血管，有助于分別研究血管和淋巴管在腫瘤中的作用。目前，關(guān)于新生血管和淋巴管在胃腸道惡性腫瘤中的特點(diǎn)和臨床意義的研究，集中于進(jìn)展期的胃腸道惡性腫瘤，主要研究新生血

4、管、淋巴管與淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。早期的胃腸道上皮性腫瘤，特別是局限在粘膜內(nèi)的胃腸道上皮性腫瘤中新生血管和淋巴管的分布特點(diǎn)及其臨床意義的研究較少。脈管浸潤(rùn)在胃腸道腫瘤中多見(jiàn)，但脈管浸潤(rùn)在胃腸道腫瘤中的判定方法和臨床意義尚無(wú)一致性結(jié)論。目前國(guó)內(nèi)外資料中未見(jiàn)關(guān)于比較局限于粘膜和浸潤(rùn)超過(guò)粘膜的胃腸道腫瘤脈管浸潤(rùn)的研究，并且尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)血管和淋巴管浸潤(rùn)的對(duì)照研究。VEGF在腫瘤組織的血管形成中發(fā)揮重要的作用，VEGF-C具有促進(jìn)淋巴管生成的作

5、用，它們都與腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，關(guān)于胃腸道不同階段上皮性腫瘤中VEGF、VEGF-C的表達(dá)及其臨床意義的研究罕見(jiàn)。 [研究方法]選擇95例山東省腫瘤醫(yī)院2002年1月～2006年12月間手術(shù)的胃腸道腫瘤病例。其中37例為局限于粘膜內(nèi)的胃癌，28例為結(jié)直腸高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變，19例為浸潤(rùn)到粘膜層以下的胃癌，11例為浸潤(rùn)到粘膜層以下的結(jié)直腸癌。粘膜內(nèi)病例均于腫瘤的中央?yún)^(qū)和腫瘤周邊區(qū)域處取材，同時(shí)對(duì)遠(yuǎn)離腫瘤3cm以上的區(qū)域取

6、材；進(jìn)展期病例均于腫瘤組織內(nèi)隨機(jī)取材，所有取材標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋。應(yīng)用S-P免疫組織化學(xué)方法對(duì)上述標(biāo)本進(jìn)行D2-40和CD34單克隆抗體染色。CD34陽(yáng)性并且D2-40陰性的管腔樣組織結(jié)構(gòu)認(rèn)定為血管，而CD34和D2-40均陽(yáng)性的管腔樣組織結(jié)構(gòu)認(rèn)定為淋巴管。參考Weidner等的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)新生血管和新生淋巴管密度；參照Van den Eynden等描述的方法，根據(jù)CD34和D2-40狀態(tài)判定血管和淋巴管浸潤(rùn)。參照Siironen等描述的方法

7、進(jìn)行VEGF和VEGF-C的判定。 [結(jié)果]①D2-40免疫組化染色定位于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿中，顯色呈棕黃色。CD34免疫組化染色定位于小血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞膜/胞漿，呈棕黃色顆粒。②正常胃腸道組織和胃腸道粘膜內(nèi)上皮性腫瘤組織的微血管密度(Bloodmicrovessel density,BMVD>無(wú)顯著性差異(74.25 vs 63.33，P=-0.166)。在胃粘膜內(nèi)癌和結(jié)直腸高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變的亞組分析中同樣顯示正常組織和腫瘤

8、組織的BMVD無(wú)顯著性差異(分別為：87.08 vs.68.61，P=0.166；47.25 vs.51.44，P=0.101)。胃和結(jié)直腸粘膜內(nèi)上皮性腫瘤組織的BMVD無(wú)顯著性差異(71.19vs.60.96，P=0.400)。胃正常粘膜組織的BMVD顯著高于結(jié)直腸正常粘膜組織的BMVD(87.09 vs.47.25)。腫瘤內(nèi)的淋巴管少見(jiàn)。腫瘤組織的微淋巴管密度(Lymph microvessel density,LMVD)明顯高于正

9、常組織的LMVD(20.87 vs.14.56，P=0.003)。亞組分析表明不論是在胃粘膜內(nèi)癌(20.06 vs.14.47，P=0.044)還是在結(jié)直腸高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(22.69 vs.14.75，P=0.018)均存在這種差異。胃和結(jié)直腸腫瘤的LMVD無(wú)顯著性差異(20.49 vs.20.36，P=0.970)。胃和結(jié)直腸正常粘膜組織的LMVD無(wú)顯著性差異(14.47 vs.14：75，P=0.868)。淋巴結(jié)陽(yáng)性患者的BMVD

10、高于淋巴結(jié)陰性患者的BMVD(107.60 vs.63.38，P=0.047)。淋巴結(jié)陽(yáng)性和淋巴結(jié)陰性患者的LMVD無(wú)顯著的差異(26.80 vs.19.90，P=0.277)。③BVI與LVI顯著相關(guān)(P<0.001)。免疫組化法發(fā)現(xiàn)的脈管浸潤(rùn)顯著高于HE法發(fā)現(xiàn)的脈管浸潤(rùn)(P<0.001)。腫瘤浸潤(rùn)深度與BVI(1.5％vs.33.3％，P<0.001)和LVI(7.7％ vs.40.0％，P<0.001)顯著相關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)與B

11、VI(6.9％ vs.26.1％，P=0.022)和LVI(6.9％ vs.52.2％，P<0.001)顯著相關(guān)。④VEGF和VEGF-C的表達(dá)水平在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者和浸潤(rùn)到粘膜下層的胃腸道腫瘤患者中顯著增高。 [結(jié)論及意義]①在早期病變組中，胃正常粘膜組織的BMVD顯著高于結(jié)直腸正常粘膜組織的BMVD。腫瘤內(nèi)的淋巴管少見(jiàn)。腫瘤的LMVD明顯高于正常粘膜組織的LMVD。而腫瘤的BMVD與正常粘膜組織的BMVD無(wú)顯著性差異。淋巴結(jié)陽(yáng)

12、性患者的BMVD高于淋巴結(jié)陰性患者的BMVD。而淋巴結(jié)陽(yáng)性和淋巴結(jié)陰性患者的LMVD無(wú)顯著的差異。這些結(jié)果提示血管和淋巴管在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展的不同階段和不同部位發(fā)揮不同的作用。根據(jù)這一規(guī)律，可以有針對(duì)性的對(duì)不同部位的腫瘤采用不同的方法阻斷腫瘤發(fā)展不同階段的相關(guān)環(huán)節(jié)，提高治療腫瘤的療效。②對(duì)于BVI和LVI的檢測(cè)，免疫組化法比常規(guī)HE法有更高的特異性和敏感性；BVI和LVI可能是胃癌和結(jié)直腸癌重要的預(yù)測(cè)預(yù)后因子。③VEGF和VEGF-C與