運用細胞和多種分子遺傳學(xué)技術(shù)行丙二酰輔酶A脫羧酶缺乏癥病人的診斷.pdf

1、背景:丙二酰輔酶A脫羧酶(Malonyl Coenzyme A decarboxylase,MCD)缺乏癥(OMIM248360)是極其罕見的常染色體隱性遺傳代謝性疾病,亦稱丙二酸尿癥(malonic aciduria)。1984年Brown首報了該疾病,1999年K.A.Sacksteder,D.R.FitzPatrick,Jim Gao三人分別克隆了導(dǎo)致MCD缺乏癥的MLYCD基因,迄今為止,全世界共報導(dǎo)32例病例包括23種不同的基

2、因突變(見附表1),其臨床表現(xiàn)多變:常見有中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常如兒童早期智障,發(fā)育遲緩,癲癇,張力減退,腦部器質(zhì)性病變；腹瀉,嘔吐,肥厚型心肌病等,甚至導(dǎo)致新生兒死亡。其他少見癥狀有身材矮小,嗜睡,厭食,胃腸炎,聽力障礙,面容畸形等。實驗室檢查常見尿有機酸代謝異常(如丙二酰尿,甲基丙二酰尿),低血糖,代謝性酸中毒,酮癥酸中毒,乳酸血癥等。國內(nèi)暫無該疾病的研究報導(dǎo)。
　　 目的:運用細胞和多種分子遺傳學(xué)方法對1例丙二酰輔酶A脫羧酶(M

3、CD)缺乏癥患者及其家系進行研究,為患者及其家庭提供準確的診斷和遺傳咨詢,為臨床上MCD缺乏患者的基因診斷提供指導(dǎo)。
　　 方法:
　　 ①對患者行尿有機酸代謝篩查；
　　 ②對患者行常規(guī)細胞遺傳學(xué)分析；
　　 ③對患者及其父母外周血和患者皮膚gDNA.的MLYCD基因的5個外顯子及其側(cè)翼序列行PCR擴增并測序；
　　 ④對患者及其父母外周血和患者皮膚cDNA的MLYCD基因行PCR擴增并測序；<

4、br>　　 ⑤對患者外周血gDNA行全基因組拷貝數(shù)基因芯片檢測；
　　 ⑥對患者及其父母外周血gDNA的MLYCD基因行MLPA檢測；
　　 ⑦對50個無關(guān)個體的外周血gDNA針對發(fā)現(xiàn)的MLYCD基因的新錯義突變位點行PCR擴增并測序；
　　 結(jié)果:
　　 1、患者尿有機酸代謝篩查結(jié)果:09年8月24日發(fā)現(xiàn)尿丙二酸增高；09年9月24日復(fù)查示尿丙二酸更增高,甲基丙二酸輕度增高；
　　 2、患者外

5、周血淋巴細胞染色體G帶、高分辨核型發(fā)現(xiàn)550-850條帶階段無異常。
　　 3、gDNA的MLYCD基因測序,患者存在c.920T>G(p.Leu307Arg)雜合錯義突變,父親存在雜合錯義突變c.920T>G(p.Leu307Arg)和雜合同義SNP(c.732G>A；p.ser266ser),母親存在雜合錯義SNP(c.776G>C；p.Gly259Ala)；
　　 4、cDNA的MLYCD基因測序,患者存在純合父源

6、錯義突變c.920T>G(p.Leu307Arg),母親存在純合錯義SNP(c.776G>C；p.Gly259Ala),父親存在雜合錯義突變c.920T>G(p.Leu307Arg)和雜合同義SNP(c.732G>A；p.ser266ser)；
　　 5、基因芯片顯示患者沒有微缺失微重復(fù)異常；
　　 6、MLPA技術(shù)示患者及母親gDNA的MLYCD基因皆存在Exonl雜合缺失,父親正常。
　　 7、新錯義突變在5

7、0個無關(guān)個體中未有發(fā)現(xiàn)。且通過與其他物種行序列同源比對(包括人,猩猩,牛,大鼠,小鼠),發(fā)現(xiàn)該錯義突變位點皆為保守T。
　　 結(jié)論:
　　 1.患者父源MLYCD基因存在c.920T>G(p.Leu307Arg),為文獻未報導(dǎo)的新突變,該新突變位點在不同物種中皆保守。
　　 2.患者母源MLYCD基因存在Exon1缺失,且該鏈MLYCD基因不表達。
　　 3.確診患者為MLYCD基因復(fù)合雜合突變,導(dǎo)致丙二