原發(fā)性胰島素樣生長(zhǎng)因子1缺乏癥分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、背景：
　　原發(fā)性胰島素樣生長(zhǎng)因子1缺乏癥（primary IGF-1 deficiency,PIGFD）又名生長(zhǎng)激素不敏感綜合癥，臨床表現(xiàn)為非生長(zhǎng)激素缺乏性矮小，伴有低IGF-1血癥。主要分子缺陷位于生長(zhǎng)激素-胰島素樣生長(zhǎng)因子-1軸中（growth hormone-insulin-like growth factor-1 axis,GH-IGF-1 axis）。
　　PIGFD是一系列涵蓋生長(zhǎng)軸分子缺陷的疾病總稱,分子缺陷

2、可牽涉到所有參與GH-IGF-1軸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、以及下游產(chǎn)物IGF系統(tǒng)發(fā)揮生理作用的調(diào)控機(jī)制。因此涵蓋了一系列不同臨床表型及生化特征。
　　現(xiàn)已知GH-IGF1軸上8大候選基因（GHR,STAT5B,PTPN11，I?Bα，IGF1，IGFALS,IGF1R和GH1）參與PIGFD形成。尚有大量未知基因及調(diào)控機(jī)制參與GH的分泌與IGF系統(tǒng)。
　　目的：
　　國(guó)內(nèi)目前對(duì)該病的GH-IGF1軸分子缺陷資料較少,嘗試將血清I

3、GF-1SDS<-2的非生長(zhǎng)激素缺乏性矮小患兒等價(jià)為原發(fā)性IGF-1缺乏患兒，依據(jù)表型特征鎖定候選基因，篩查GH-IGF-1軸分子缺陷。
　　目前國(guó)內(nèi)外對(duì)GHR基因的突變檢測(cè)聚焦在2~10外顯子，本研究重點(diǎn)檢測(cè)GHR基因，包含12種轉(zhuǎn)錄本外顯子區(qū)及啟動(dòng)子區(qū)。
　　方法：
　　1、收集25例無(wú)宮內(nèi)發(fā)育障礙、無(wú)免疫缺陷病史的PIGFD患者及89例正常成年對(duì)照，明確性別構(gòu)成分布無(wú)顯著性差異。
　　2、依據(jù)表型特點(diǎn)確定候

4、選基因，PCR測(cè)序篩查分子缺陷：重點(diǎn)篩查 GHR、IGFALS基因，排除性篩查JAK2、STAT5B基因。
　　3、采用病例對(duì)照關(guān)聯(lián)分析法，研究常見(jiàn)變異與PIGFD發(fā)病機(jī)制的關(guān)聯(lián)性：
　?、胚x擇位于GHR基因編碼區(qū)的非同義改變單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（non-synonymous coding SNPs,nsSNPs）及生長(zhǎng)激素第3外顯子（GHR exon3），經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)明確各基因型頻率是否達(dá)到遺傳平衡

5、，且具有群體代表性。
　?、品治霾±龑?duì)照組中等位基因、基因型、顯性/隱性模型下基因型分布頻率是否具有顯著性差異，計(jì)算等位基因和基因型的OR值及95％CI。使用AR%和PAR%進(jìn)行危險(xiǎn)因素的危險(xiǎn)度分析。
　　⑶以nsSNPs的基因型分組，采用Kruskal Wallis檢驗(yàn)，比較攜帶不同基因型的患者其臨床表型(HtSDS、CA-BA、BMI SDS、TH SDS、IGF-1 SDS、IGFBP3 SDS、GH峰值)差別有無(wú)顯著

6、性意義。
　?、?nsSNPs連鎖不平衡及單倍域分析，探討疾病與遺傳的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果：
　　1、臨床特點(diǎn)：25名患者均無(wú)陽(yáng)性家族史。以身高的矮小程度分組：組1共12位，身高位于-2 SDS~-3.5 SDS之間；組2共13位，身高小于-4 SDS，其中2例表現(xiàn)有中面部發(fā)育不良。2組血IGF-1與IGFBP3缺乏程度不完全平行。
　　2、基因篩查及關(guān)聯(lián)分析：
　?、?GHR基因
　?、侔l(fā)現(xiàn)3種堿基改

7、變：1例已知突變（IVS6 ds+1 G-A），2例未知變異（V2啟動(dòng)子區(qū) Chr.5-42423799bp CC→CG；V9A5'UTR區(qū)Chr.5-42424526bp GG→GT）；
　　②發(fā)現(xiàn)4個(gè)非同義 SNPs位點(diǎn)：rs6180、rs6182、rs6183、rs6184，彼此間不構(gòu)成單倍域；
　　③GHR外顯子3、rs6182、rs6183、rs6184位點(diǎn)與原發(fā)性IGF-1缺乏癥無(wú)相關(guān)性；
　　④rs618

8、0等位基因分布頻率存在顯著性差異（p=0.0272）,等位基因 C在疾病中為危險(xiǎn)性因素，AR%=57.57%，PAR%=26.3%?；蛐图帮@性和隱性模型下的基因型分布頻率無(wú)顯著性差異（p>0.05）。以rs6180基因型分組，表型參數(shù)各組間差別無(wú)顯著性意義（p>0.05）。
　　⑵IGFALS基因
　　2例新發(fā)現(xiàn)突變:c.1097T>C c.1098C>Tp.V366A和c.1229C>Tp.S410L；1例未知變異（5'

9、UTR Chr.16-1843707bp AA→GG）。
　?、桥懦院Y查結(jié)果：JAK2基因編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)突變，非編碼區(qū)及內(nèi)含子區(qū)發(fā)現(xiàn)9種未知變異，功能未明；STAT5b基因未發(fā)現(xiàn)突變。與臨床表型一致。
　　結(jié)論：
　　1、PIGFD患者的臨床主要特征為非生長(zhǎng)激素缺乏性矮小伴低IGF-1血癥。GHR和IGFALS基因缺陷是PIGFD的重要分子缺陷。
　　2、此次候選基因外顯子突變篩查顯示，GHR及IGFALS基因發(fā)