淫羊藿苷對體外培養(yǎng)人外周血內(nèi)皮祖細胞數(shù)量及NO分泌的影響.pdf

1、目的：通過體外分離、培養(yǎng)人外周血內(nèi)皮祖細胞，觀察不同濃度的淫羊藿苷和阿托伐他汀對內(nèi)皮祖細胞(EPCs)數(shù)量及NO分泌的影響。
　　 方法：
　　 1、密度梯度離心法分離培養(yǎng)人外周血EPCs。
　　 2、免疫熒光法觀察細胞吸收Dil-acLDL和FITC-UEA-I情況，流式細胞儀定量檢測EPCs表面標記CD133、CD34的抗原表達情況。
　　 3、倒置顯微鏡下觀察EPCs的形態(tài)學變化。
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2、、實驗分組：將貼壁細胞隨機分為空白對照組、淫羊藿苷組(終濃度為10、25、50ng/mL)、阿托伐他汀組(終濃度10μmol/L)。
　　 5、采用細胞計數(shù)法觀察EPCs的數(shù)量變化，硝酸還原酶法檢測細胞培養(yǎng)液中NO含量以了解其對EPCs分泌功能的影響。
　　 結(jié)果
　　 1、倒置顯微鏡下動態(tài)觀察可見：在培養(yǎng)的第2天細胞開始出現(xiàn)成簇現(xiàn)象；第4天細胞開始由圓形轉(zhuǎn)為梭形貼壁細胞；細胞培養(yǎng)第7日，多數(shù)細胞呈梭形或多角形，

3、且有集落樣結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。
　　 2、熒光顯微鏡可下見吸收Dil-acLDL、FITC-UEA-I的細胞分別發(fā)紅色、綠色熒光，二者雙染發(fā)黃色熒光，被認為是正在分化的EPCs；流式細胞儀示貼壁細胞表達CD34陽性(38.36±3.7)％CD133陽性(13.91±1.47)％，進一步證實所培養(yǎng)細胞為EPCs。
　　 3、不同濃度淫羊藿苷組、阿托伐他汀組與EPCs培養(yǎng)24h后，顯示均能較對照組明顯提高EPCs數(shù)量，并且EPCs數(shù)量

4、隨淫羊藿苷濃度增加而增加。淫羊藿苷在50ng/ml時對細胞數(shù)量改善最為顯著，對50ng/ml的淫羊藿苷進行時效作用的研究，結(jié)果顯示各組呈時間依賴性的增強EPCs的數(shù)量，48h達到高峰。
　　 4、在體外培養(yǎng)條件下，10ng/ml淫羊藿苷組的觀察指標與對照組相比EPCs培養(yǎng)上清中NO濃度差別不明顯，25，50ng/ml組與對照組相比EPCs培養(yǎng)上清中NO濃度明顯提高，且48小時組較24小時組作用效果增強。阿托伐他汀組與對照組相比，