淫羊藿苷對(duì)體外培養(yǎng)人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及NO分泌的影響.pdf

1、目的：通過(guò)體外分離、培養(yǎng)人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞，觀察不同濃度的淫羊藿苷和阿托伐他汀對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)數(shù)量及NO分泌的影響。
　　 方法：
　　 1、密度梯度離心法分離培養(yǎng)人外周血EPCs。
　　 2、免疫熒光法觀察細(xì)胞吸收Dil-acLDL和FITC-UEA-I情況，流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)EPCs表面標(biāo)記CD133、CD34的抗原表達(dá)情況。
　　 3、倒置顯微鏡下觀察EPCs的形態(tài)學(xué)變化。
　　 4

2、、實(shí)驗(yàn)分組：將貼壁細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組、淫羊藿苷組(終濃度為10、25、50ng/mL)、阿托伐他汀組(終濃度10μmol/L)。
　　 5、采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法觀察EPCs的數(shù)量變化，硝酸還原酶法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量以了解其對(duì)EPCs分泌功能的影響。
　　 結(jié)果
　　 1、倒置顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察可見(jiàn)：在培養(yǎng)的第2天細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)成簇現(xiàn)象；第4天細(xì)胞開(kāi)始由圓形轉(zhuǎn)為梭形貼壁細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)第7日，多數(shù)細(xì)胞呈梭形或多角形，

3、且有集落樣結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。
　　 2、熒光顯微鏡可下見(jiàn)吸收Dil-acLDL、FITC-UEA-I的細(xì)胞分別發(fā)紅色、綠色熒光，二者雙染發(fā)黃色熒光，被認(rèn)為是正在分化的EPCs；流式細(xì)胞儀示貼壁細(xì)胞表達(dá)CD34陽(yáng)性(38.36±3.7)％CD133陽(yáng)性(13.91±1.47)％，進(jìn)一步證實(shí)所培養(yǎng)細(xì)胞為EPCs。
　　 3、不同濃度淫羊藿苷組、阿托伐他汀組與EPCs培養(yǎng)24h后，顯示均能較對(duì)照組明顯提高EPCs數(shù)量，并且EPCs數(shù)量

4、隨淫羊藿苷濃度增加而增加。淫羊藿苷在50ng/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞數(shù)量改善最為顯著，對(duì)50ng/ml的淫羊藿苷進(jìn)行時(shí)效作用的研究，結(jié)果顯示各組呈時(shí)間依賴(lài)性的增強(qiáng)EPCs的數(shù)量，48h達(dá)到高峰。
　　 4、在體外培養(yǎng)條件下，10ng/ml淫羊藿苷組的觀察指標(biāo)與對(duì)照組相比EPCs培養(yǎng)上清中NO濃度差別不明顯，25，50ng/ml組與對(duì)照組相比EPCs培養(yǎng)上清中NO濃度明顯提高，且48小時(shí)組較24小時(shí)組作用效果增強(qiáng)。阿托伐他汀組與對(duì)照組相比，