丁苯酞對MPTP帕金森病模型小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元TH、DAT、p-JNK-JNK表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 帕金森病(PD)是一種常見的與年齡相關(guān)的神經(jīng)變性疾病,主要特征是黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的進行性丟失和變性。JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是MAPK通路的一條重要分支,它在細(xì)胞周期、生產(chǎn)、凋亡和細(xì)胞應(yīng)激等多種生理和病理過程中起重要作用。目前研究證據(jù)表明帕金森病發(fā)生有JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的參與。丁苯酞是從我國南方的一種水芹菜籽中分離出的有效成分,簡稱NBP,又名芹菜甲素,是中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物研究所人工合成的消旋體,從80

2、年代開始馮亦璞帶領(lǐng)該所開始研究NBP的藥理作用:能改善缺血區(qū)局部腦血流,增加缺血區(qū)毛細(xì)血管的數(shù)量,增加缺血區(qū)腦血流量,改善缺血性腦能量代謝,縮小梗死面積,減輕神經(jīng)功能損傷程度,減輕腦水腫；還可改善線粒體功能,增強呼吸鏈功能,能改善線粒體能量泵,增加抗氧化作用,從而發(fā)揮抗凋亡；能增加大鼠全腦缺血紋狀體細(xì)胞外液氨基酸和多巴胺含量。故本試驗依據(jù)JNK在PD發(fā)病的作用來研究NBP對MPTP誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)毒性是否具保護作用。我們選擇丁苯酞用于

3、MPTP制備C57BL/6帕金森病小鼠模型,用免疫組織化學(xué)染色方法和westernblot檢測帕金森病小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元TH、DAT、p-JNK/JNK表達(dá)情況,觀察并分析其表達(dá)意義。
　　 方法：
　　 1、動物分組:30只C57BL/6小鼠采用完全隨機分組法分為以下3組,每組10只。(1)正常對照組(NS+植物油):腹腔注射與MPTP組等體積生理鹽水5d,再注射與治療組等體積植物油14d。(2)MPTP組(MPT

4、P+植物油):采用MPTP(30mg/kg)連續(xù)5 d腹腔注射,然后改用與治療組等體積植物油注射14 d。(3)NBP治療組(MPTP+NBP):先以MPTP(30 mg/kg)連續(xù)腹腔注射5 d,然后丁基苯酞(NBP40 mg/kg)腹腔注射14 d。每組動物于第19天處死后取腦組織進行固定石蠟包埋,取中腦黑質(zhì)部位切片進行免疫組織化學(xué)染色；另外一側(cè)腦組織提取出黑質(zhì)后迅速置于-80℃冰箱冷凍用于westernblot。
　　 2

5、、模型制備:MPTP(30 mg/kg)連續(xù)5 d腹腔注射,注射藥物后小鼠即刻出現(xiàn)步態(tài)跚,易激惹,毛及鼠尾豎起等反應(yīng),約5～10 min后復(fù)常態(tài),即視為模型制備成功。
　　 3、免疫組織化學(xué)染色方法檢測TH、DAT的表達(dá)。
　　 4、Westernblot方法檢測p-JNK、JNK的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、與正常對照組相比,MPTP組小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元中的TH陽性神經(jīng)元表達(dá)數(shù)目明顯減少(P<0

6、.05)；與MPTP組相比,NBP治療組小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元中TH陽性神經(jīng)元表達(dá)數(shù)目增加(P<0.05),二者均具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2、與正常對照組相比,MPTP組小鼠黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維中的DAT陽性神經(jīng)纖維表達(dá)數(shù)目明顯減少(P<0.05)；與MPTP組相比,NBP治療組小鼠黑質(zhì)紋狀體中DAT陽性神經(jīng)纖維數(shù)目表達(dá)增加(P<0.05),二者均具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3、正常對照組幾乎未見p-JNK表達(dá),MPT