PDTC對(duì)慢性MPTP帕金森病小鼠模型黑質(zhì)Bcl-xL表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 (1)探討慢性MPTP帕金森病模型小鼠黑質(zhì)DA神經(jīng)元減少與NF-кB通路依賴的凋亡蛋白Bcl-xL表達(dá)之間的關(guān)系。
　　 (2)探索NF-кB通路抑制劑(PDTC)在PD預(yù)防中的作用。
　　 方法：
　　 本研究采用慢性MPTP帕金森病小鼠(C57/BL)模型,隨機(jī)將小鼠分成正常組,實(shí)驗(yàn)組,預(yù)防組,每組40只,均在同等條件下飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)組用小鼠MPTP25mg/kg腹腔注射,一周兩次,持續(xù)5周

2、；正常組腹腔注射與實(shí)驗(yàn)組等量的0.9％生理鹽水；預(yù)防組先腹腔注射PDTC40mg/kg,半小時(shí)后注射MPTP25mg/kg。注射完畢后,在不同時(shí)間點(diǎn),觀察各組小鼠的行為學(xué)、形態(tài)學(xué)情況；采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)酪氨酸羥化酶和Bcl-xL的表達(dá)；采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法檢測(cè)黑質(zhì)Bcl-xLmRNA表達(dá)情況。分析:①神經(jīng)毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)誘導(dǎo)的慢性帕金森病(Parkinson's disease,P

3、D)模型小鼠,黑質(zhì)Bcl-xL表達(dá)及時(shí)間依賴性關(guān)系,了解NF-кd3通路對(duì)DA神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用；Bcl-xL表達(dá)與黑質(zhì)DA神經(jīng)元減少以及與小鼠行為學(xué)反應(yīng)的一致性關(guān)系。②NF-кB(Nuclear factor-kappaB)通路抑制劑-二硫代氨基甲酸毗咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)對(duì)Bcl-xL表達(dá)及黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元數(shù)目的影響。
　　 結(jié)果：
　　 (1)行為學(xué)觀察結(jié)果:與對(duì)

4、照組比較,實(shí)驗(yàn)組小鼠出現(xiàn)震顫、豎毛、流涎、活動(dòng)減少、動(dòng)作緩慢等異常行為,爬桿時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.05),預(yù)防組出現(xiàn)部分癥狀,較實(shí)驗(yàn)組明顯減輕。
　　 (2)形態(tài)學(xué)改變:HE染色法染色后,與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量明顯減少(P<0.05),而預(yù)防組神經(jīng)元減少?zèng)]有實(shí)驗(yàn)組明顯(P<0.05),但仍未達(dá)到對(duì)照組水平(P<0.05)。
　　 (3)SABC免疫組化法結(jié)果:處理完畢后,在12h～24h時(shí),實(shí)驗(yàn)

5、組黑質(zhì)區(qū)Bcl-xL蛋白較對(duì)照組表達(dá)增高,與其平均光密度(MOD)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1w～2w時(shí),Bcl-xL表達(dá)較24h減少(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組TH陽(yáng)性細(xì)胞減少(P<0.05),且在12h～24h時(shí),TH陽(yáng)性細(xì)胞較1w～2w增加(P<0.05)。預(yù)防組結(jié)果與實(shí)驗(yàn)組恰恰相反。
　　 (4)RT-PCR結(jié)果:在12h時(shí),實(shí)驗(yàn)組中腦黑質(zhì)Bcl-xL mRNA表達(dá)較對(duì)照組增加(P<0.05),在24h時(shí)表達(dá)

6、達(dá)到高峰,1w～2w時(shí),其表達(dá)較對(duì)照組減少(P<0.05)。預(yù)防組與實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)相反結(jié)果。
　　 結(jié)論：
　　 (1)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:慢性MPTP帕金森病C57BL小鼠模型中,NF-кB通路介導(dǎo)的Bcl-xL表達(dá)參與了對(duì)DA神經(jīng)元凋亡的調(diào)控。
　　 (2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:NF-кB通路對(duì)Bcl-xL的調(diào)控表現(xiàn)為雙向性,且這種作用具有時(shí)間依賴性,但最終導(dǎo)致DA神經(jīng)元減少。
　　 (3)NF-кB通路抑制劑(PDT