肥厚型心肌病心肌肌球蛋白結(jié)合蛋白C基因突變的研究.pdf

1、目的：1.利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行山東地區(qū)漢族人群中肥厚型心肌病患者中肌球蛋白結(jié)合蛋白C基因突變的研究；2.篩選該病的致病突變；3.通過與國外相關(guān)研究的比較，探討中國漢族人群肥厚型心肌病患者在肌球蛋白結(jié)合蛋白C基因上發(fā)生突變的概率是否具有相似性；4.對基因型與表現(xiàn)型之間的關(guān)系進(jìn)行分析；5.建立一種在基因水平上對肥厚型心肌病患者進(jìn)行臨床前期診斷的方法。 方法：1.臨床收集76例肥厚型心肌病患者(均為山東醫(yī)科大學(xué)齊魯醫(yī)院門診及住院患者

2、)，在知情同意的前提下抽取外周靜脈血約2mL，提取白細(xì)胞，利用酚-氯仿法抽提基因組DNA；2.聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增MYBPC基因相應(yīng)的外顯子14-15、17、26、27、33，對擴增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳以了解擴增的效率及特異性；3.利用單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)分析PCR擴增產(chǎn)物，處理后的產(chǎn)物行8﹪及10﹪非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，銀染法顯色觀察結(jié)果；4.根據(jù)同一塊膠上電泳條帶遷移率的差異判斷是否為陽性結(jié)果，出現(xiàn)異常條帶者將

3、目的片段連接T載體并轉(zhuǎn)染細(xì)菌，培育后送檢測序；5.對基因突變陽性者進(jìn)行家系調(diào)查及臨床表型分析。 結(jié)果：1.我們成功地對76例肥厚型心肌病患者的肌球蛋白結(jié)合蛋白C基因的第14-15、17、26、27、33號外顯子進(jìn)行了PCR擴增；2.全部擴增產(chǎn)物均經(jīng)過兩種條件下的單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)進(jìn)行基因突變的篩選，通過調(diào)整反應(yīng)條件，使每一個PCR產(chǎn)物均顯示清晰的單鏈條帶，與正常人相應(yīng)的單鏈帶進(jìn)行了比較分析；3.在一患者的肌球蛋白結(jié)合

4、蛋白C基因第26號外顯子上發(fā)現(xiàn)了一個新的突變位點Arg856fs。 結(jié)論：1.PCR-SSCP銀染技術(shù)對于HCM患者的肌球蛋白結(jié)合蛋白C基因突變的檢測是適用的，并可以進(jìn)行推廣；2.肌球蛋白結(jié)合蛋C基因的第26外顯子上發(fā)現(xiàn)了一個新的突變位點Arg856fs，經(jīng)檢索世界上尚未見相同的報道；3.山東地區(qū)漢族人群肥厚型心肌病患者在肌球蛋白結(jié)合蛋白C基因第14-15、17、26、27、33外顯子上的突變發(fā)生率可能低于國外先前的相關(guān)報道；4