青藤堿的腸吸收特性及藥動學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　 青藤堿（Sinomenine）是從中藥青風(fēng)藤中提取的生物堿單體，具有抗炎、抗免疫、鎮(zhèn)痛、降血壓、促組胺釋放等藥理作用，廣泛用于治療風(fēng)濕性及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。該藥物在臨床應(yīng)用一般需長期口服，且用藥劑量偏大、給藥間隔短，有研究表明青藤堿半衰期短，生物利用度低，與其他藥物合用時可產(chǎn)生相互作用。
　　 本研究采取吸收模型與體內(nèi)藥動學(xué)相結(jié)合研究中藥有效成分單體青藤堿及其提取物在正常和病理條件下的體內(nèi)過程，預(yù)測影響其口服

2、吸收的因素，探討導(dǎo)致青藤堿口服生物利用度低的原因，可為臨床合理用藥、劑型設(shè)計及結(jié)構(gòu)改造提供參考，并有利于原植物青風(fēng)藤的進一步開發(fā)和利用。通過上述工作，也可為藥物滲透性、吸收和生物利用度預(yù)測方面的計算方法和模型提供有價值的數(shù)據(jù)，有利于探索提高口服制劑生物利用度的理論基礎(chǔ)與研究手段。
　　 方法：
　　 本文建立了灌流液及血漿樣品中各藥物成分的高效液相色譜（HPLC）定量分析方法，用以進行青藤堿的吸收特性與藥代動力學(xué)研究；采

3、用在體單向灌流法對青藤堿及其提取物在大鼠小腸的吸收特性進行系統(tǒng)的研究，并應(yīng)用已建立的HPLC法測定灌流液中青藤堿的濃度，計算有效滲透系數(shù)，應(yīng)用SPSS 16.0軟件比較青藤堿及其提取物的吸收情況；正常大鼠和肝纖維化大鼠分別灌胃給予考察青藤堿及其提取物，按實驗設(shè)計在不同時間點采血，應(yīng)用已建立的HPLC法測定血漿中青藤堿的濃度，采用DAS 2.0軟件計算藥動學(xué)參數(shù)，應(yīng)用SPSS 16.0軟件比較正常大鼠和肝纖維化大鼠的藥動學(xué)參數(shù)。
　

4、　 1、本實驗所建立的灌流液中各藥物成分的HPLC定量分析方法學(xué)結(jié)果顯示，各組分分離完全，且空白腸灌流液中的物質(zhì)不干擾藥物的測定；日內(nèi)和日間RSD均小于15％，回收率均在95～105％之間；各成分在灌流液中4 h內(nèi)穩(wěn)定。該方法可滿足生物樣品分析的要求。
　　 2、各腸段NWF值為負值，表明水分在腸道有吸收；通過對大鼠各腸段的Peff進行比較，青藤堿在各腸段吸收無顯著性差異（P>0.05），氫氯噻嗪、茶堿的Peff均與文獻值相近

5、，且符合BCS分類；在同一腸段，濃度對Peff有明顯影響（P<0.05），在低、中濃度時，青藤堿的Peff隨劑量的增大而增加，但在高濃度時，其Peff降低；加入抑制劑后P-gp表達最豐富的空腸段的腸有效滲透系數(shù)明顯增加；提取物中青藤堿濃度對Peff有明顯影響（P<0.05），在低、中濃度時，Peff隨劑量的增大而增加，高濃度時，Peff降低；相同濃度的提取物在十二指腸和空腸段的滲透性系數(shù)較青藤堿單體均有所下降，中、高濃度的數(shù)據(jù)有顯著性差

6、異（P<0.05）。
　　 3、本實驗所建立的青藤堿大鼠血漿樣品的HPLC定量分析方法學(xué)結(jié)果顯示，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾青藤堿和內(nèi)標的測定；回歸方程為Y=0.148X-0.007，r=0.9985，線性范圍0.2～50.0μg·mL-1，定量下限為0.2 μg·mL-1；該方法的日內(nèi)精密度、日間精密度和準確度均符合要求，低、中、高三個濃度的提取回收率均大于75％。內(nèi)標提取回收率接近70％；樣品中青藤堿在凍融、室溫和長期冷凍狀態(tài)下

7、保持穩(wěn)定，均無明顯降解?？捎糜谘獫{中青藤堿濃度的測定以及藥動學(xué)研究。
　　 4、大鼠灌胃給予青藤堿60、30、15 mg·kg-1的藥動學(xué)均符合二室模型，各劑量組的t1/2z、Tmax、MRT無顯著性差異（P>0.05）；Cmax、AUC均有顯著性差異（P<0.05），隨劑量增加而增加，藥動學(xué)行為基本呈線性關(guān)系；三組Vz/F、CLz/F均有顯著性差異（P<0.05），隨劑量增加而減小。高、中劑量（30 mg·kg-1）提取物組較

8、青藤堿組的AUC、Cmax顯著降低（P<0.05），CLz/F及Vz/F顯著增加（P<0.05）。
　　 5、肝纖維化大鼠組的肝臟呈肝纖維化病理改變，可用于本課題藥動學(xué)的研究。各劑量青藤堿在肝纖維大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程也均符合二室模型，肝纖維化大鼠各劑量組的t1/2z、Tmax、MRT無顯著性差異（P>0.05）；在肝纖維化鼠中，高劑量組AUC、Cmax雖顯著高于低劑量組（P<0.05），但較中劑量組無明顯增加（P>0.05）

9、，中劑量組與低劑量組均有顯著性差異（P<0.05）；三組Vz/F、CLz/F均有顯著性差異（P<0.05）。肝纖維化鼠灌胃給予青藤堿后的藥物動力學(xué)行為，與正常大鼠相比有顯著性差異（P<0.05）：其中t1/2z、Tmax、MRT差異不大；給予高劑量（60 mg·kg-1）時，正常鼠的AUC、Cmax均大于肝纖維化鼠，Vz/F、CLz/F小于肝纖維化鼠；給予中、低劑量（60、30mg·kg-1）時，與高劑量相反，正常鼠的AUC、Cmax均

10、小于肝纖維化鼠，Vz/F、CLz/F則大于肝纖維化鼠。
　　 結(jié)論：
　　 1、本實驗建立的單向灌流模型穩(wěn)定，可用于青藤堿吸收特性的研究；青藤堿屬于高滲透性藥物，在各腸段均有較好吸收（P>0.05），無特定吸收部位；濃度對青藤堿的有效滲透系數(shù)有顯著影響（P<0.05），存在高濃度（300.0 μmol·L-1）飽和現(xiàn)象，其吸收機制為主動轉(zhuǎn)運；加入P-gp抑制劑鹽酸維拉帕米（100 μmol·L-1）后，空腸段的腸有效滲透

11、系數(shù)明顯增加（P<0.05），青藤堿可能是P-gp的底物；提取物中復(fù)雜成分對青藤堿腸吸收有顯著影響。
　　 2、本研究建立的青藤堿大鼠血漿樣品測定方法具有干擾小，專屬性高，準確度好、穩(wěn)定的特點，可用于血漿中青藤堿濃度的測定及藥動學(xué)研究；大鼠灌胃給予青藤堿與青藤堿提取物后的藥動學(xué)行為具有顯著性差異（P<0.05）；肝纖維化鼠灌胃給予青藤堿后的藥物動力學(xué)行為，與正常大鼠相比有顯著性差異（P<0.05）。
　　 綜上所述，青藤