江蘇省海門市肝癌高發(fā)地區(qū)人群乙型肝炎病毒進(jìn)化分析.pdf

1、江蘇省海門市地處長江三角洲地區(qū),是原發(fā)性肝細(xì)胞癌的高發(fā)幣。HBV感染是海門市肝癌高發(fā)的最重要危險(xiǎn)因素,應(yīng)在肝癌防治決策時(shí)予以充分重視。在同一生存環(huán)境條件下,HBV感染可促使肝癌發(fā)病年齡提前。
　　乙型肝炎病毒是一種DNA病毒,有四個(gè)重疊的開放讀碼框架(S、C、P和X)。S基因的變異可改變HBsAg的空間結(jié)構(gòu)和免疫原性,導(dǎo)致其抗原性和蛋白表達(dá)水平下降。C基因變異將影響HBV病毒載量及HCC進(jìn)程,其主要突變是nt1896G→A,使HB

2、eAg合成終止。HBV基本核心啟動(dòng)子中最重要、最常見的基因突變是nt1762A→T、nt1764G→A雙突變,既增強(qiáng)HBV復(fù)制力,又降低HBeAg合成,還增加肝細(xì)胞凋亡,從而加重患者病情。P基因變異以YMDD基序的變異(aaM552V或aaM552I,生成YVDD或YIDD)最為重要,YMDD變異伴“a”決定簇內(nèi)變異時(shí)可使HBV的復(fù)制能力明顯增強(qiáng)。
　　目前發(fā)現(xiàn)的HBV已有A-J共10種基因型,我國主要流行的是B和C基因型。HBV

3、基因型與感染的預(yù)后有關(guān),與B基因型相比,C基因型HBV與肝癌的發(fā)病更加密切,也會(huì)導(dǎo)致更嚴(yán)重的肝纖維化結(jié)局。而不同基因型混合感染可引起攜帶者肝炎復(fù)燃。
　　本研究采用多階段隨機(jī)抽樣,在充分考慮抽樣可行性和科學(xué)性的基礎(chǔ)上對(duì)海門市一般人群進(jìn)行乙肝血清學(xué)調(diào)查,包括一般情況,肝炎患病史,乙肝病毒暴露史,乙肝疫苗免疫接種史等。采用ELISA檢測方法定性檢測HBsAg及半定量檢測抗-HBs,對(duì)HBsAg陽性血清抽提DNA,并用巢氏PCR擴(kuò)增HB

4、VS基因及LA-PCR擴(kuò)增HBVDNA,從而掌握當(dāng)?shù)豀BV的流行規(guī)律、變異及主要基因型。
　　本項(xiàng)目調(diào)查對(duì)象共計(jì)5,624人,HBsAg陽性率為6.035％。不同性別人群間的HBsAg陽性率不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。＜30歲人群HBsAg陽性率明顯低于≥30歲人群HBsAg陽性率,10歲以下兒童HBsAg陽性率為0％。文化程度越高,HBsAg陽性率越低。醫(yī)護(hù)人員的HBsAg陽性率最低,農(nóng)民的HBsAg陽性率最高。長期一起生活的直系血親中有

5、乙肝患者人群的HBsAg陽性率遠(yuǎn)高于直系血親中沒有乙肝患者人群的HBsAg陽性率。做過手術(shù)和做過內(nèi)窺鏡人群的HBsAg陽性率分別高于沒有做過的人群的HBsAg陽性率。獻(xiàn)血人群的HBsAg陽性率低于沒有獻(xiàn)血人群的HBsAg陽性率。不同出生地點(diǎn)調(diào)查對(duì)象的HBsAg陽性率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,表現(xiàn)為:出生于縣級(jí)以上醫(yī)院者＜出生于鄉(xiāng)鎮(zhèn)級(jí)醫(yī)院者＜出生于家中者。Logistic回歸分析顯示,乙肝感染相關(guān)因素中,長期一起生活的親人中患有乙肝、做過內(nèi)窺鏡是調(diào)

6、查對(duì)象乙肝感染的危險(xiǎn)因素,而獻(xiàn)血是調(diào)查對(duì)象乙肝感染的保護(hù)因素。后者可能是健康工人偏倚所致。
　　抗-HBs滴度＜10IU/ml者占43.334％;抗-HBs滴度＞10IU/ml人群中,抗-HBs滴度越高所占構(gòu)成比越高。HBsAg陰性人群與一般人群的抗-HBs滴度分布比例相似;HBsAg陽性人群中,抗一HBs滴度＜10IU/ml者所占比例為90.845％,抗-HBs滴度位于(10,160)IU/ml者所占比例均低于1.5％,但是抗-

7、HBs滴度＞160IU/ml者所占比例為5.282％。不同性別人群間抗-HBs滴度的分布比例基本相同。年齡越低,抗.HBs滴度＜10IU/ml者占該年齡段人群比例越低?？?HBs滴度＞10IU/ml人群中,小于10歲人群里位于(40,80]IU/ml者所占比例最低;[10,60)歲人群抗-HBs滴度分布與一般人群抗-HBs滴度分布相似;60歲以上人群各個(gè)抗-HBs滴度人群所占比例基本相同。不同文化程度和職業(yè)人群的抗-HBs滴度分布近似于

8、該年齡段人群的抗-HBs滴度分布。是否做過內(nèi)窺鏡(做過內(nèi)窺鏡者的抗-HBs滴度較低)和不同的出生地點(diǎn)(出生于縣級(jí)以上醫(yī)院＞鄉(xiāng)鎮(zhèn)級(jí)醫(yī)院＞在家出生者的抗.HBs滴度)對(duì)人群的抗-HBs滴度分布比例有影響。Logistic回歸分析顯示,乙肝感染相關(guān)因素中,是否做過內(nèi)窺鏡是抗-HBs是否具有保護(hù)作用的危險(xiǎn)因素。
　　乙肝疫苗計(jì)劃免疫前出生人群的HBsAg陽性率遠(yuǎn)高于乙肝疫苗計(jì)劃免疫后出生人群的HBsAg陽性率,抗-HBs平均滴度則表現(xiàn)相反

9、。曾經(jīng)在村醫(yī)或個(gè)體診所做過牙科診療、與家人共用牙刷和在鄉(xiāng)鎮(zhèn)及鄉(xiāng)鎮(zhèn)級(jí)以上醫(yī)院出生的人群中,乙肝疫苗計(jì)劃免疫前出生人群HBsAg陽性率分別高于乙肝疫苗計(jì)劃免疫后出生人群的HBsAg陽性率,抗-HBs平均滴度則表現(xiàn)相反。
　　巢式PCR擴(kuò)增HBVS基因檢測陽性率為45.8％。B基因型占10.8％,C基因型占86.9％,B/C混合型占2.3％。C基因型HBVS基因(特別在親水區(qū)(nt245-nt391))的變異度普遍高于B基因型。相同基因

10、型的不同患病類型乙肝患者的HBVS基因之間并無明顯分隔,而B基因型HBVS基因之間同源性更高。所有可能導(dǎo)致HBV的抗原性和免疫應(yīng)答發(fā)生改變的樣本均為C基因型,占5.38％,平均年齡為46.71±1.17歲,抗-HBs均小于10IU/ml。海門市乙肝HBsAg主要為adrq+血清型(82.3％),其次為adw2血清型(16.2％)。
　　LA-PCR擴(kuò)增HBVDNA檢測陽性率為15.4％,DNA在1814nt～2452nt區(qū)域相對(duì)比

11、較保守。4例樣本pre-C基因發(fā)生nt1896G→A單個(gè)堿基替換。B基因型HBVBCP并未發(fā)生雙重突變(nt1762A→T和nt1764G→A);C基因型HBVBCP中,發(fā)生雙重突變(nt1762A→T和nt1764G→A)的占全部C基因型的47.06％,僅發(fā)生nt1762A→T突變者占5.88％,僅發(fā)生nt1764G→A突變者占11.76％。海門市與黑龍江和上海的HBV平均進(jìn)化距離差距最小,其次為北京、安徽、啟東、臺(tái)灣和西藏。海門市H

12、BV平均進(jìn)化距離與中國其他地區(qū)HBV平均進(jìn)化距離的差距主要出于基因型分布的差異所致。
　　就C基因型HBVDNA而言,海門株之間的進(jìn)化距離比較大,也大于某些地區(qū)株與海門株之間的進(jìn)化距離。海門株與本地區(qū)及其他各個(gè)地區(qū)株之間的pre-C/C基因、C基因和X基因進(jìn)化距離普遍小于同樣地區(qū)之間的HBVDNA進(jìn)化距離,而P基因的進(jìn)化距離則普遍大于同樣地區(qū)之間的HBVDNA進(jìn)化距離。與其他地區(qū)相比,海門株之間的pre-S1/pre-S2區(qū)域序列

13、變異程度較大,同源性較低。盡管海門市為HCC高發(fā)區(qū),但是從海門市一般人群中篩選出的HBVDNA與其他地區(qū)的HCC患者的HBVDNA之間的同源性并不高,反而與北京等地區(qū)的慢性HBV患者的HBVDNA之間的同源性較高。
　　經(jīng)過近二十年的乙肝疫苗計(jì)劃免疫工作,海門市HBV的預(yù)防工作卓有成效,HBV感染情況已經(jīng)得到明顯好轉(zhuǎn)。青少年的HBV感染率并未隨著年齡的增長而有所上升;而隨著當(dāng)?shù)爻赡耆四挲g的增長,乙肝患者體內(nèi)HBV可能會(huì)被清除,或是

14、由于HBVS基因變異所致的HBsAg假陰性。
　　海門市HBV存在家庭內(nèi)或家族聚集感染,可能是垂直傳播,遺傳因素,水平傳播綜合作用的結(jié)果;從病毒學(xué)方面看,HBV家族聚集性感染和非家族聚集感染臨床類型差異不大。海門市HBV也通過內(nèi)窺鏡檢查進(jìn)行傳播。僅出生地點(diǎn)的不同對(duì)HBV感染有影響,說明出生時(shí)所接受到的醫(yī)療水平程度對(duì)HBV感染有影響。乙肝疫苗計(jì)劃免疫對(duì)于中低教育程度和中低收入家庭來說,是預(yù)防HBV感染的主要途徑。鄉(xiāng)鎮(zhèn)及鄉(xiāng)鎮(zhèn)以下級(jí)別醫(yī)

15、院的牙科診療可能是海門市HBV社會(huì)傳播的途徑之一,家庭內(nèi)共用牙刷可能也是海門市HBV家庭內(nèi)傳播的途徑之一。
　　綜上所述,海門市一般人群HBV感染的主要影響因素為:年齡、受教育程度、直系血親中是否有人患有乙肝、是否做過內(nèi)窺鏡、出生地點(diǎn)和乙肝疫苗計(jì)劃免疫。年齡、受教育程度和出生地點(diǎn)主要影響乙肝疫苗的免疫接種,而海門市HBV感染主要來源于垂直傳播途徑和通過內(nèi)窺鏡、牙科診療和家庭內(nèi)共用牙刷等水平傳播途徑。乙肝疫苗的及時(shí)接種是阻止海門市H

16、BV傳播的最有效的方法。
　　海門市HBVS基因已經(jīng)出現(xiàn)了能改變HBV抗原性和免疫原性的變異,應(yīng)當(dāng)密切關(guān)注以防止乙肝疫苗失效。海門市作為HCC高發(fā)區(qū),當(dāng)?shù)豀BVDNA與其他非HCC高發(fā)區(qū)HBVDNA(無論是否來源于HCC患者)的差異并不顯著,X基因的差異甚至更小,提示盡管血清HBV病毒水平是HCC發(fā)生獨(dú)立的預(yù)期因素,且慢性乙型肝炎炎癥應(yīng)答過程中逐漸累積的基因改變是HCC發(fā)生的最重要因素,但HBV的變異程度并不是海門市HCC高發(fā)的直