豆粕發(fā)酵制備抗氧化肽的研究.pdf

1、本論文對(duì)發(fā)酵法制備大豆抗氧化活性肽進(jìn)行了較深入的研究，為改良大豆抗氧化肽的生產(chǎn)方法及開(kāi)發(fā)大豆抗氧化肽產(chǎn)品提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本論文從實(shí)驗(yàn)室保存的12株蛋白酶產(chǎn)生菌中篩選出大豆抗氧化活性肽高產(chǎn)菌株Jb009，該菌株蛋白酶活力達(dá)到2.28u/mL。 采用單因素試驗(yàn)和二因素二次回歸通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)分析優(yōu)化固態(tài)發(fā)酵大豆抗氧化活性肽工藝，得到最佳工藝條件為：培養(yǎng)基中豆粕與麩皮比例為4:1，水分含量為66.7％，起始pH為8.49，接

2、種量為25.0％，種齡48h，發(fā)酵溫度為33.7℃，發(fā)酵時(shí)間為36h。在此條件下反應(yīng)產(chǎn)物的總抗氧化活性理論值可達(dá)557.72U/g豆粕。 應(yīng)用單因素試驗(yàn)、析因試驗(yàn)、最速上升試驗(yàn)和二因素二次回歸通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)分析，優(yōu)化獲得最佳液態(tài)發(fā)酵大豆抗氧化活性肽工藝條件為：培養(yǎng)基料液比1:25，pH值為7.39，接種量為5.19％，種齡36h，發(fā)酵溫度37℃，發(fā)酵時(shí)間36h。在此條件下反應(yīng)產(chǎn)物的總抗氧化活性理論值可達(dá)795.75U/g豆粕。

3、液態(tài)發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵兩種方式比較液態(tài)方式略高，選取液態(tài)發(fā)酵為最佳發(fā)酵方式。 測(cè)定大豆抗氧化肽的抗氧化活性，利用T－AOC方法測(cè)定總抗氧化活性；水楊酸法測(cè)定清除羥基自由基活性；鄰苯三酚法測(cè)定清除超氧陰離子活性；卵磷脂法測(cè)定抑制脂質(zhì)體過(guò)氧化能力；POV值法測(cè)定抗油脂自氧化能力；亞油酸自氧化法測(cè)定清除烷基過(guò)氧化物活性；DPPH法測(cè)定清除DPPH自由基活性；脫氧核糖法測(cè)定對(duì)DNA氧化損傷的保護(hù)能力。得到大豆抗氧化肽的總抗氧化活性為50.07

4、U，對(duì)羥基自由基的清除率達(dá)到85.68％；抑制鄰苯三酚自氧化能力達(dá)到23.61U/mL；抑制脂質(zhì)體過(guò)氧化能力為34.58％；對(duì)油脂過(guò)氧化抑制抑制率為30％；對(duì)烷基自由基的清除能力達(dá)到72.27％；對(duì)DPPH自由基清除率為35％；對(duì)DNA氧化損傷的保護(hù)能力達(dá)38.77％。 大豆抗氧化活性肽發(fā)酵液經(jīng)10kDa膜超濾后冷凍干燥，溶解，經(jīng)DEAE-Sepharose離子交換柱，Sephadex G-25 Medium凝膠層析柱分離純化，

5、并用Tricine-SDS-Page測(cè)定純度和分子量范圍，得到分子量在6kDa和8kDa純度較高的兩個(gè)組分：PtⅣ－1和PtⅦ－2。氨基酸分析發(fā)現(xiàn)：PtⅣ－1中，天冬氨酸含量達(dá)到27.85％，比豆粕和超濾液中含量分別增長(zhǎng)了207.5％和89.46％，谷氨酸含量達(dá)到30.41％，也分別增長(zhǎng)了101.79％和28.80％；而PtⅦ－2中，含羥基的中性氨基酸蘇氨酸含量達(dá)到9.41％，比豆粕和超濾液中含量分別增長(zhǎng)了131.77％和141.28％