Cap43基因在肺癌患者組織和血清中表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、Cap43基因是具有特征性氨基酸結(jié)構(gòu)序列的一種新基因,是在其C末端由十個氨基酸TRSRSHTSEG重復(fù)三次所組成的序列,同時(shí)它在眾多的腫瘤組織中表達(dá)上調(diào),其mRNA和蛋白一旦被誘導(dǎo)生成就會持續(xù)穩(wěn)定高表達(dá)。以往的研究通過免疫組化和蛋白印跡技術(shù)發(fā)現(xiàn)Cap43蛋白在肺腺癌、腦膠質(zhì)瘤等腫瘤組織中呈現(xiàn)穩(wěn)定的高表達(dá),而在正常細(xì)胞或組織中不表達(dá)或呈極低表達(dá),實(shí)驗(yàn)研究人員根據(jù)這一研究結(jié)果來區(qū)分正常與異常的組織。為此對該蛋白在肺癌病人血清中的表達(dá)是否與其

2、在腫瘤組織中的高表達(dá)具有同樣的趨勢產(chǎn)生了很大興趣,擬采用定量血清學(xué)ELISA檢測手段,利用它靈敏度高、特異性強(qiáng)、取材容易等優(yōu)點(diǎn)來對血清樣本進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),通過定量檢測15例肺癌病人和正?;旌蠈φ昭逄崾?,肺癌組血清Cap4含量明顯大于正常對照組(P-<0.001),且該蛋白在肺腺癌組表達(dá)明顯高于肺鱗癌組。同時(shí)擬應(yīng)用免疫組化S-P法對肺癌不同組織學(xué)類型中Cap43的表達(dá)進(jìn)行檢測,觀察檢測結(jié)果是否與血清學(xué)檢測結(jié)果具有同樣的趨勢。

3、 目的: 采用雙抗夾心ELISA和免疫組化方法分別檢測肺癌患者血清和腫瘤組織中Cap43蛋白的表達(dá)含量,并進(jìn)一步分析這兩種檢測結(jié)果之間有無相關(guān)性。 方法: 1、制備實(shí)驗(yàn)所需的兔抗Cap43多克隆抗體; 2、初步建立雙抗體夾心ELISA法,定性和定量檢測91肺癌患者與正常人群血清中各自的Cap43蛋白含量; 3、采用免疫組化S-P方法檢測對照組肺組織及83例肺癌術(shù)后患者的腫瘤組織中Cap43蛋白

4、的含量。 結(jié)果: 1、制備的兔抗Cap43多克隆抗體經(jīng)初步純化后效價(jià)為1∶500; 2、初步建立的雙抗ELISA血清學(xué)檢測方法中,確定的包被抗體羊抗人NDRG1多克隆抗體、Ⅰ抗兔抗人Cap43多克隆抗體、辣根酶(HRP)標(biāo)記的羊抗兔Ⅱ抗的最佳工作濃度分別為,1∶750、1∶1200、1∶350,標(biāo)準(zhǔn)蛋白曲線的回歸方程為:為y=0.53566+0.00046x,R<'2>=0.9939。應(yīng)用該方法初步檢測結(jié)果提示,

5、肺癌組血清標(biāo)本Cap43蛋白含量明顯高于對照組,且肺腺癌組病人血清Cap43含量高于肺鱗癌組; 3、免疫組化檢測結(jié)果提示,對照組中無Cap43蛋白表達(dá),但肺癌組織中有Cap43蛋白的表達(dá)且肺腺癌組的Cap43表達(dá)含量要高于肺鱗癌組。 結(jié)論: 1、初步建立了一種敏感度高,重復(fù)性好的定量檢測血清中Cap43蛋白的雙抗體夾心ELISA方法; 2、應(yīng)用該方法檢測的肺癌患者血清中Cap43的表達(dá)含量以及腫瘤組織Ca

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