大鼠同種異體角膜移植排斥反應(yīng)動(dòng)物模型的建立及NK細(xì)胞在角膜排斥反應(yīng)中作用的研究.pdf

1、角膜疾病是眼科臨床工作中最常見(jiàn)的疾病之一,其致盲率在我國(guó)盲目流行病學(xué)調(diào)查中排名第二,僅次于白內(nèi)障。且角膜損傷的瘢痕修復(fù)及角膜內(nèi)皮細(xì)胞的不可再生性都嚴(yán)重影響角膜病的治療和預(yù)后,因此,對(duì)于治療角膜盲,角膜移植是臨床上唯一可靠、有效的復(fù)明手段,與其他臟器移植比較。角膜移植有明顯的免疫學(xué)特點(diǎn)即免疫特惠,盡管如此,隨著現(xiàn)代顯微手術(shù)和角膜保存技術(shù)的發(fā)展,移植術(shù)后的免疫排斥反應(yīng)已成為角膜移植失敗的主要因?yàn)?。所?建立合適的角膜移植動(dòng)物模型,對(duì)進(jìn)一步模

2、擬人的角膜移植排斥反應(yīng),進(jìn)行更加深入的基礎(chǔ)研究具有非常重要的意義。
　　 角膜移植排斥反應(yīng)的機(jī)制是多種免疫細(xì)胞和免疫分子參與的復(fù)雜的免疫反應(yīng)過(guò)程,有效地防治角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)的發(fā)生是降低角膜移植排斥率的實(shí)際問(wèn)題,大量研究依據(jù)輔助T淋巴細(xì)胞(helpert lymphocte,Th1/Th2)學(xué)說(shuō)探討各類免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子參與角膜移植排斥反應(yīng)的調(diào)控機(jī)制,現(xiàn)今的研究和臨床藥物大多數(shù)針對(duì)T淋巴細(xì)胞系統(tǒng),而近來(lái)實(shí)驗(yàn)證明剔除T淋巴細(xì)

3、胞的動(dòng)物角膜移植模型,仍然會(huì)發(fā)生排斥反應(yīng)。自然殺傷細(xì)胞(Nature Killed Cell,NK細(xì)胞)是一類獨(dú)立的淋巴細(xì)胞群,有報(bào)道提出NK細(xì)胞具有對(duì)異體抗原的識(shí)別,然后釋放細(xì)胞因子來(lái)激活不同的效應(yīng)細(xì)胞的作用,而國(guó)內(nèi)關(guān)于NK細(xì)胞在角膜移植排斥反應(yīng)中作用的研究尚未有相關(guān)報(bào)道。
　　 研究目的:
　　 建立大鼠同種異體角膜移植模型,觀察角膜排斥反應(yīng)的臨床表現(xiàn)及進(jìn)行排斥反應(yīng)的病理學(xué)研究,分析手術(shù)中注意事項(xiàng)及操作技巧、術(shù)后并發(fā)

4、癥的因?yàn)榧皩?duì)策,提高大鼠角膜移植模型的成功率。初步研究NK細(xì)胞在大鼠同種異體角膜移植排斥反應(yīng)中的作用。
　　 主要方法:
　　 1.大鼠同種異體穿透性角膜移植動(dòng)物模型的建立
　　 1.1實(shí)驗(yàn)組:Wistar雌性大鼠40只,SD(Sprague-Dawley)雌性大鼠40只,用直徑3.5mm的環(huán)鉆鉆取SD大鼠右眼角膜,作為同種異體角膜移植植片,用直徑3.0mm的環(huán)鉆鉆取Wistar大鼠右眼角膜作為植床,用10-0尼

5、龍線將角膜植片間斷縫合于角膜植床上,為同種異體角膜移植組。
　　 1.2對(duì)照組:Wistar雌性大鼠40只,用3.0mm環(huán)鉆鉆取右眼角膜,于12:00位做標(biāo)記,旋轉(zhuǎn)180°后,用10-0尼龍線原位間斷縫合于植床上,為同體角膜移植對(duì)照組。1.3術(shù)后觀察:觀察術(shù)后角膜移植排斥反應(yīng)發(fā)生的進(jìn)程,于術(shù)后不同時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠角膜植片情況進(jìn)行排斥反應(yīng)評(píng)分。
　　 2.大鼠同種異體角膜移植排斥反應(yīng)發(fā)生的病理學(xué)研究及并發(fā)癥的分析<

6、br>　　 實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組分別于PO6、PO8、PO12、PO24、PO45各取4只術(shù)眼眼球,10％甲醛固定,石蠟包埋,HE染色。觀察隨著排斥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展,角膜植片可出現(xiàn)基質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn),植片厚度,植片新生血管,植片內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目等方面變化。觀察記錄和總結(jié)術(shù)中術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生和預(yù)防方法。
　　 3.自然殺傷細(xì)胞在大鼠同種異體角膜移植排斥反應(yīng)中作用的研究
　　 分別于PO2、PO4、PO6、PO8、PO10、PO12等不同時(shí)

7、間點(diǎn),取實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠外周血,應(yīng)用CD3-CD161+的NK細(xì)胞特異性抗體標(biāo)記外周血內(nèi)NK細(xì)胞,行流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù),分析NK細(xì)胞術(shù)后不同時(shí)間在淋巴細(xì)胞中所占比例的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1.SD大鼠與Wistar大鼠間同種異體角膜移植組與Wistar大鼠自體角膜移植組之間角膜排斥反應(yīng)指數(shù)(Rejection Value RV值)存在明顯差異,實(shí)驗(yàn)組排斥反應(yīng)發(fā)生率為100％,異體移植片存活時(shí)間為(9.65±0.77)天。
　

8、　 2.同種異體角膜移植組與自體角膜移植組大鼠植片病理切片中,在角膜植片基質(zhì)浸潤(rùn)、植片厚度、新生血管等方面存在顯著差異,兩組共80例動(dòng)物模型中術(shù)后出現(xiàn)虹膜前粘連6例,白內(nèi)障4例,眼內(nèi)感染3例,虹膜脫出3例。
　　 3.同種異體角膜移植組術(shù)后早期大鼠外周血中NK細(xì)胞占淋巴細(xì)胞比例明顯高于對(duì)照組,結(jié)果有顯著差異,NK細(xì)胞計(jì)數(shù)峰值出現(xiàn)在術(shù)后第(4.4±0.82)天。
　　 結(jié)論：
　　 1.大鼠角膜主要組織相容性抗原