角膜內皮移植及其排斥反應的研究.pdf

1、目的：①研究在角膜內皮移植(EK)手術中保留后彈力層是否會影響供體植片的貼敷。②評價不同方法獲取Descemet膜-角膜內皮細胞復合體(DM+CECs)的效果。③利用后彈力層撕除術建立一種新的角膜內皮失代償模型。④通過高危兔眼模型分析角膜內皮移植術后效果及免疫排斥反應特點。 方法：⑴根據(jù)手術方法的不同將30只兔分成3組：去除后彈力層組(DSEK組)、不去除后彈力層組(nDSEK組)和供體組，每組10只，右眼為手術眼。術后用裂隙燈

2、觀察角膜的透明情況，用UBM測量角膜厚度。術后8周獲取角膜瓣進行組織病理觀察。⑵將20兔(40只眼)根據(jù)手術方法的不同隨機分成4組：鑷子剝離、水分離、大氣泡法和機械分離組(采用人工前房)，每組10眼。通過活體染色和組織切片分析評價DM+CECs。⑶根據(jù)手術方法的不同將30只兔分成三組：角膜內皮刮除組，后彈力層撕除組，DSEK組，每組10只，右眼為手術眼。每組定期通過角膜內皮活體染色，眼前節(jié)照相和UBM至少觀察2月。⑷根據(jù)手術方法的不同將

3、42只兔分成三組：對照組(未移植組)，穿透性移植(PK)組和DSEK組，每組14只，右眼為手術眼。術后用裂隙燈檢查角膜混濁、水腫和新生血管情況，并記錄排斥指數(shù)(RI)和新生血管指數(shù)(NI)。用UBM定期測量角膜厚度。采用定量PCR技術測定術后20天各組IL-2、IL-10和VEGF基因的表達。 結果：①nDSEK組術后1天有l(wèi)眼植片移位，此后，兩組均未發(fā)現(xiàn)植片移位或脫落。組織病理顯示，DSEK組術后8周未見供體植片和受體植床存在

4、明顯的分界面，纖維組織排列規(guī)整，未見瘢痕。nDSEK組術后8周仍可見后彈力層存在，但植片與植床緊密貼敷，未見明顯間隙。②鑷子剝離組獲取DM+CECs2眼成功，水分離組8眼，大氣泡法5眼和機械分離法3眼，四組之間的成功率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。水分離法(98.03±2.18％)和大氣泡法(97.14±3.04％)內皮細胞存活率(ESR)明顯高于鑷子剝離法(80.16±5.21％)和機械分離法(71.56±9.57％)(F=436

5、.04，P<0.05)。蘇木精-伊紅染色顯示水分離法和大氣泡法對內皮細胞損傷小。③后彈力層撕除組角膜始終保持混濁，角膜內皮刮除組和DSEK組角膜逐漸透明，角膜厚度逐漸減低?；铙w染色顯示角膜后彈力層撕除組術后2月仍無角膜內皮生長。④PK組和DSEK組植片存活時間分別為(28.1±8.6)天和(42.9±20.2)天，(X2=8.483 p=0.004，p<0.05)。眼前節(jié)檢查顯示PK組大部分兔眼角膜水腫、混濁及大量新生血管，而DSEK組

6、只有少量兔眼出現(xiàn)角膜混濁水腫。病理組織切片顯著PK組單核細胞浸潤明細高于DSEK組。RT-PCR結果顯示PK組IL-2、IL-10和VEGF mRNA的表達均明顯高于DSEK組。 結論：⑴供體植片與保留后彈力層的植床緊密貼敷說明角膜內皮移植術并非必須去除后彈力層。⑵水分離法或大氣泡法是安全、有效的獲取DM+CECs技術。⑶后彈力層撕除術建立的角膜內皮失代償模型可有效的用來研究角膜內皮移植研究。⑷EK術后出現(xiàn)免疫排斥反應幾率低，且