G-CSF對同種異體大鼠心臟移植的抗排斥反應(yīng)作用及其機理研究.pdf

1、自Barnard于1967年首次成功完成人類心臟移植手術(shù)以來，經(jīng)過近半個世紀的發(fā)展，目前同種異體心臟移植被公認為是治療各種終末期心臟病的最有效方法，并廣泛地應(yīng)用于臨床。然而移植排斥反應(yīng)始終是困擾臨床醫(yī)生的一個主要問題。粒細胞集落刺激因子(G-CSF)是最重要的造血生長因子之一，最新的研究成果表明其對獲得性免疫和T細胞耐受有十分重要的作用，但機制尚未闡明。本研究擬應(yīng)用改良的同種異體大鼠腹腔異位心臟移植模型，探討G-CSF對心臟移植免疫的調(diào)

2、節(jié)作用及其可能機制。
　　目的：改良原有大鼠腹腔異位心臟移植模型的外科技巧，建立成功率高且更加易于實施的心臟移植模型。利用此改良模型研究G-CSF對心臟移植排斥反應(yīng)的作用，探討其可能機理，為臨床有效調(diào)控、治療心臟移植排斥反應(yīng)及其他免疫性疾病提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.對傳統(tǒng)Ono術(shù)式的受體準備、供心切取和吻合方法等環(huán)節(jié)進行改進，采用此改良方法建立大鼠腹部異位心臟移植模型。
　　2.Lewis（RT1）與B

3、N（RTn）大鼠各40只隨機分為4組（每組10只，Lewis大鼠為受體，BN大鼠為供體），于移植術(shù)后當天起分別給予各組受體鼠重組人粒細胞集落刺激因子（rh-G-CSF）0μg/kg/day（對照組）、125μg/kg/day、250μg/kg/day、500μg/kg/day，共6天。術(shù)后第6天行供心組織學(xué)檢查、混合淋巴反應(yīng)實驗（MLR），并觀察各組供心存活時間。探討不同劑量的rh-G-CSF對大鼠心臟移植排斥反應(yīng)的抑制作用。
　

4、　3.對于第二步實驗篩選出的250μg/kg/day組進一步行細胞因子檢測、外周血流式細胞儀檢測以及過繼轉(zhuǎn)移實驗，其各項指標與各對照組（包括普通大鼠、只移植心臟不使用G-CSF大鼠、只使用G-CSF不移植心臟大鼠）比較，探討rh-G-CSF對心臟移植排斥反應(yīng)抑制作用的機理。
　　結(jié)果：
　　1.共實施100例大鼠腹部異位心臟移植術(shù)，89例成功。供心缺血時間32±5min，整個手術(shù)耗時60±10min。
　　2.250μ

5、g組與500μg組在體內(nèi)、外均顯示排斥反應(yīng)較對照組顯著減弱，125μg組中以上各指標與對照組比較無顯著差異。
　　3.在心臟移植受體鼠和普通大鼠的骨髓中CD4+CD25+T細胞比例顯著高于外周血。在不使用rh-G-CSF的情況下，心臟移植手術(shù)前、后大鼠外周血CD4+CD25+T細胞比例無顯著變化。給予普通大鼠rh-G-CSF250μg/kg/day共6天后以及術(shù)后給予心臟移植受體鼠rh-G-CSF250μg/kg/day共6天后，

6、其骨髓細胞中CD4+CD25+T細胞數(shù)量都有顯著地下降，并伴隨外周血CD4+CD25+T細胞比例顯著增加。Rh-G-CSF處理心臟移植受體鼠后，使其MLR體系中白細胞介素10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)顯著增加，其包含有CD4+CD25+T細胞的脾細胞可以將抗排斥反應(yīng)作用過繼轉(zhuǎn)移給第二級受體鼠，并且在過繼轉(zhuǎn)移實驗和MLR中均顯示出較強的免疫抑制能力。
　　結(jié)論：
　　1.經(jīng)典的Ono術(shù)式經(jīng)改進后，術(shù)中縮短

7、了供心缺血時間，降低了吻合難度，手術(shù)成功率高。整個過程均可單人操作，無需顯微鏡，使其易于掌握與開展。
　　2.G-CSF可以在體內(nèi)、外誘導(dǎo)T細胞的低反應(yīng)性，其抗心臟移植排斥反應(yīng)的作用與劑量有關(guān)。
　　3.同種異體抗原刺激和手術(shù)創(chuàng)傷并不能誘導(dǎo)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的增殖。G-CSF增加外周血的CD4+CD25+T細胞是其發(fā)揮抗排斥作用的重要機制。G-CSF將骨髓中的CD4+CD25+T細胞動員至外周血是本實驗外周血中C