G-CSF對(duì)同種異體大鼠心臟移植的抗排斥反應(yīng)作用及其機(jī)理研究.pdf

1、自Barnard于1967年首次成功完成人類心臟移植手術(shù)以來，經(jīng)過近半個(gè)世紀(jì)的發(fā)展，目前同種異體心臟移植被公認(rèn)為是治療各種終末期心臟病的最有效方法，并廣泛地應(yīng)用于臨床。然而移植排斥反應(yīng)始終是困擾臨床醫(yī)生的一個(gè)主要問題。粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)是最重要的造血生長因子之一，最新的研究成果表明其對(duì)獲得性免疫和T細(xì)胞耐受有十分重要的作用，但機(jī)制尚未闡明。本研究擬應(yīng)用改良的同種異體大鼠腹腔異位心臟移植模型，探討G-CSF對(duì)心臟移植免疫的調(diào)

2、節(jié)作用及其可能機(jī)制。
　　目的：改良原有大鼠腹腔異位心臟移植模型的外科技巧，建立成功率高且更加易于實(shí)施的心臟移植模型。利用此改良模型研究G-CSF對(duì)心臟移植排斥反應(yīng)的作用，探討其可能機(jī)理，為臨床有效調(diào)控、治療心臟移植排斥反應(yīng)及其他免疫性疾病提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.對(duì)傳統(tǒng)Ono術(shù)式的受體準(zhǔn)備、供心切取和吻合方法等環(huán)節(jié)進(jìn)行改進(jìn)，采用此改良方法建立大鼠腹部異位心臟移植模型。
　　2.Lewis（RT1）與B

3、N（RTn）大鼠各40只隨機(jī)分為4組（每組10只，Lewis大鼠為受體，BN大鼠為供體），于移植術(shù)后當(dāng)天起分別給予各組受體鼠重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（rh-G-CSF）0μg/kg/day（對(duì)照組）、125μg/kg/day、250μg/kg/day、500μg/kg/day，共6天。術(shù)后第6天行供心組織學(xué)檢查、混合淋巴反應(yīng)實(shí)驗(yàn)（MLR），并觀察各組供心存活時(shí)間。探討不同劑量的rh-G-CSF對(duì)大鼠心臟移植排斥反應(yīng)的抑制作用。
　

4、　3.對(duì)于第二步實(shí)驗(yàn)篩選出的250μg/kg/day組進(jìn)一步行細(xì)胞因子檢測、外周血流式細(xì)胞儀檢測以及過繼轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，其各項(xiàng)指標(biāo)與各對(duì)照組（包括普通大鼠、只移植心臟不使用G-CSF大鼠、只使用G-CSF不移植心臟大鼠）比較，探討rh-G-CSF對(duì)心臟移植排斥反應(yīng)抑制作用的機(jī)理。
　　結(jié)果：
　　1.共實(shí)施100例大鼠腹部異位心臟移植術(shù)，89例成功。供心缺血時(shí)間32±5min，整個(gè)手術(shù)耗時(shí)60±10min。
　　2.250μ

5、g組與500μg組在體內(nèi)、外均顯示排斥反應(yīng)較對(duì)照組顯著減弱，125μg組中以上各指標(biāo)與對(duì)照組比較無顯著差異。
　　3.在心臟移植受體鼠和普通大鼠的骨髓中CD4+CD25+T細(xì)胞比例顯著高于外周血。在不使用rh-G-CSF的情況下，心臟移植手術(shù)前、后大鼠外周血CD4+CD25+T細(xì)胞比例無顯著變化。給予普通大鼠rh-G-CSF250μg/kg/day共6天后以及術(shù)后給予心臟移植受體鼠rh-G-CSF250μg/kg/day共6天后，

6、其骨髓細(xì)胞中CD4+CD25+T細(xì)胞數(shù)量都有顯著地下降，并伴隨外周血CD4+CD25+T細(xì)胞比例顯著增加。Rh-G-CSF處理心臟移植受體鼠后，使其MLR體系中白細(xì)胞介素10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)顯著增加，其包含有CD4+CD25+T細(xì)胞的脾細(xì)胞可以將抗排斥反應(yīng)作用過繼轉(zhuǎn)移給第二級(jí)受體鼠，并且在過繼轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)和MLR中均顯示出較強(qiáng)的免疫抑制能力。
　　結(jié)論：
　　1.經(jīng)典的Ono術(shù)式經(jīng)改進(jìn)后，術(shù)中縮短

7、了供心缺血時(shí)間，降低了吻合難度，手術(shù)成功率高。整個(gè)過程均可單人操作，無需顯微鏡，使其易于掌握與開展。
　　2.G-CSF可以在體內(nèi)、外誘導(dǎo)T細(xì)胞的低反應(yīng)性，其抗心臟移植排斥反應(yīng)的作用與劑量有關(guān)。
　　3.同種異體抗原刺激和手術(shù)創(chuàng)傷并不能誘導(dǎo)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的增殖。G-CSF增加外周血的CD4+CD25+T細(xì)胞是其發(fā)揮抗排斥作用的重要機(jī)制。G-CSF將骨髓中的CD4+CD25+T細(xì)胞動(dòng)員至外周血是本實(shí)驗(yàn)外周血中C